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对实验《绿叶中色素提取及分离》思索及改进[摘要] 新人教版高中《生物（必修）》第一册课本中，实验《绿叶中色素的提取和分离》，按照课本上的操作步骤，看不清胡萝卜素的色素带。改变有机溶剂试验，在圆形滤纸上层析试验，效果都不明显。最后，在等腰三角形滤纸上层析，效果很好，看到了清晰的胡萝卜素的色素带。 [关键词] 实验 色素 胡萝卜素 丙酮 圆形滤纸 等腰三角形滤纸 在新人教版高中《生物（必修）》第一册课本中的光合作用部分，有《绿叶中色素的提取和分离》的实验。通过该实验，学生可以掌握实验方法，了解绿叶中色素的组成，进而为以后学习叶绿体的结构及光合作用做好充分的准备。 该实验的实验原理：绿叶中的色素能够溶解在有机溶剂无水乙醇中，所以可以用无水乙醇提取绿叶中的色素。绿叶中的色素不止一种，他们都能溶解在层析液中。然而，他们在层析液中的溶解度不同：溶解度高的随层析液在滤纸上扩散的快，反之，溶解度低的随层析液在滤纸上扩散的慢。这样，几分钟之后，绿叶中的色素就会随着层析液在滤纸上的扩散而分离开。 实验的方法步骤： 1.提取绿叶中的色素 （1）称取5g的绿叶（菠菜叶），剪碎，放入研钵中。（2）向研钵中放入少许二氧化硅和碳酸钙，再加入10ml无水乙醇，进行迅速、充分的研磨。（3）将研磨液迅速倒入玻璃漏斗（漏斗基部放一块单层尼龙布）中进行过滤。将滤液收集到试管中，及时用棉塞将试管口塞严。 2.制备滤纸 将干燥的定性滤纸剪成小于试管长与直径的滤纸条，将滤纸条的一端剪去两角，并在距这一端1cm处用铅笔画一条细的横线。 3.画滤液细线 用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线均匀地画出一条细线。待滤液干后，再画一两次。 4.分离绿叶中的色素 将适量的层析液（93号汽油）倒入试管中，将滤纸条（有滤液细线的一端朝下）轻轻地插入层析液中，随后用棉塞塞紧试管口。注意：不能让滤液细线触及层析液。 5.观察与记录 观察试管内滤纸条上出现了几条色素带，以及每条色素带的颜色。将观察结果记录下来。 在实验过程中，本人严格依照实验步骤进行，做到每一步操作都符合要求。做完之后，观察滤纸条，上面的色素带最下层一条黄绿色，是叶绿素b，非常清晰。其上一条蓝绿色，是叶绿素a，也清晰。再往上一条黄色，是叶黄素，颜色很淡。最上面一条，应该是橙黄色的胡萝卜素，但是颜色非常淡，隐隐约约，若有若无，拿到光下明亮处仔细观察，才可以看见一丝淡淡的黄色，但是却不能明确的说它是橙黄色。 怎么办？如何才能看到清晰的橙黄色的胡萝卜素色素带呢？ 也许是实验过程中操作方法有误。于是，本人又连续重复做了三次。但是最终的结果跟第一次一样，还是看不清橙黄色的色素带。其实，在绿叶中含有的色素当中，叶绿素的含量约占四分之三，由于色素含量高，叶绿素a和叶绿b素层析出来的色素带就当然清晰。而类胡萝卜素的含量约占四分之一，其中胡萝卜素的含量就更少，因此，它层析出来的色素带就必然很淡，若有若无了，根本无法看清是橙黄色。 现在，问题归结到了该如何把含量很少的胡萝卜素在滤纸上清晰的层析出来。 首先，本人想到的是有机溶剂。在研磨过程中，加入无水乙醇作为有机溶剂，是不是胡萝卜素在无水乙醇中的溶解度不高，而导致它在滤液中的含量极少，最终表现为滤纸上的色素带不清晰？于是，本人把无水乙醇换成丙酮，以丙酮为有机溶剂重做了几次以上实验，但每次的结果一样，最终还是看不清胡萝卜素的色素带。因此，可以认为问题不是出在有机溶剂上。 那么，能不能在滤纸条上增加色素含量呢？于是，本人增加了在滤纸条上画滤液细线的次数，画一次，晾干（2―3分钟），再画一次，重复了六七次。然后进行层析，结果是，各条色素带很不整齐，出现了很多层叠，显得杂乱无章。显然，画滤液细线的次数越多，就越不能保证细线的细与直，也就必然会出现层析以后色素带的重叠了。并且，作为实验课，时间非常有限，要是多次重复画滤液细线，显然时间不允许。看来，还是不能解决问题。 或者，可以改变层析滤纸的形状，在圆形滤纸上层析行不行？本人开始又一次试验。首先，剪一条长3cm，宽1.5cm的滤纸条，然后在培养皿中倒入一些色素滤液，将滤纸条在色素滤液中浸透，晾干，再浸一次。这样，滤纸条上就含有足够多的色素了。待干燥后，将其卷成长1.5cm的小圆柱，作为纸芯待用。再取一张干燥的圆形滤纸，中间打一个小孔，把饱含色素的纸芯穿人小孔，使其一端略长，另一端稍高出滤纸面即可。再取一个培养皿，倒入少许层析液，然后将圆形滤纸盖在培养皿上面，使纸芯较长的一面向下，注意让纸芯下端浸入层析液中。这时，层析液就会沿纸芯向上，然后在圆形滤纸上扩散，从而纸芯上的色素就会在滤纸上做圆形层析。几分钟后，在滤纸上出现了圆形的色素带。最靠近