重组人胰岛素原在大肠杆菌中的可溶性表达.PDFVIP

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2017-07-31 发布于天津
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重组人胰岛素原在大肠杆菌中的可溶性表达.PDF

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重组人胰岛素原在大肠杆菌中的可溶性表达

网络出版时间：2017-07-05 14:53:41 网络出版地址：/kcms/detail/12.1355.N1453.004.html 第 32 卷第期天津科技大学学报 Vol. 32 No. 2017 年月 Journal of Tianjin University of Science Technology 2017 DOI:10.13364/j.issn.1672-6510 重组人胰岛素原在大肠杆菌中的可溶性表达吕丹，闫亚丽，景丽芳，张秋荣，常莉，刁爱坡，李玉银 (工业发酵微生物教育部重点实验室，天津科技大学生物工程学院，天津 300457) 摘要：目前重组胰岛素主要用于糖尿病的治疗．通过大肠杆菌 (E. coli)密码子优化，设计人胰岛素原基因，建立利用大肠杆菌表达可溶性重组胰岛素原的技术方法．聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS)结果显示，重组质粒 pHis-NusA- insulin 诱导表达的大肠杆菌可溶性表达融合蛋白 His-NusA-insulin．重组蛋白 His-NusA-insulin 可溶性表达的最适条件为 0.1,mmol/L IPTG 作用下 37,℃诱导 4,h ，重组蛋白产物经过 Ni 柱纯化、500,mmol/L 咪唑洗脱，得到纯度较高的 1.059,μg/μL 的重组蛋白 His-NusA-insulin ，重组蛋白 His-NusA-insulin 经烟草蚀纹病毒蛋白酶 (TEV)酶切作用后，获得可溶的人胰岛素原．关键词：人胰岛素原；重组蛋白；NusA 中图分类号：Q786 文献标志码：A 文章编号：1672-6510 (2017)00-0000-00 Soluble Expression of Recombinant Human Proinsulin in E. coli LÜ Dan ，YAN Yali ，JING Lifang ，ZHANG Qiurong ，CHANG Li ，DIAO Aipo ，LI Yuyin (Key Laboratory of Industrial Fermentation Microbiology ，Ministry of Education ，College of Biotechnology ， Tianjin University of Science Technology ，Tianjin 300457 ，China) Abstract ：Recombinant insulin is used to treat diabetes at present．A human proins