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植物DNA提取方法探究进展摘 要： 本文主要介绍了近年来国内外几种常用的DNA提取方法：CTAB法、SDS法，并在对其进行了简单的归纳总结与比较分析同时，介绍了一些新的改良方法和其他植物提取方法。 关键词： 植物DNA 提取方法 研究进展 植物DNA的制备是分子生物学对各类植物进行更深入一步研究的基础，所制备出的DNA质量的好坏将直接关系到后期分子生物学试验研究的成败。目前国内外研究发现并使用的DNA提取方法有很多，其中被最为广泛应用的DNA提取方法是传统的CTAB法和SDS法。由于不同植物的材料组分各异，因此对不同植物DNA的提取存在着不同的效果。目前许多学者都在致力于研究不同的植物DNA提取方法。他们在探索新方法的同时，也针对不同的植物，在传统的提取方法上进行着一些新的改良。 1.十六烷基三乙基溴化铵（CTAB）法 在目前众多的DNA提取方法中，CTAB法是其中最为广泛应用的一种。它既可以裂解细胞，又可以有效地去除多酚类和多糖类物质的沉淀，因而经常被应用于植物的DNA提取工作中。 1.1原理及方法 CTAB是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜。同时它能与核酸形成复合物，这些复合物在高盐溶液中（0.7mol/L NaCl）是可解离的，从而可使DNA和多糖物质分开。当溶液盐浓度降低到一定程度（0.3mol/L NaCl）时，这些复合物将会从溶液中形成沉淀，随后通过离心技术就可将CTAB-核酸的复合物与蛋白类、多糖类物质分开。而对于富含多酚、多糖物质的植物组织，则通过增加提取缓冲液中β-巯基乙醇的用量，便可有效地控制酚类物质的氧化褐变及DNA的降解，用氯仿/异戊醇来沉淀蛋白质，从而提高产物的纯度。最后用乙醇来沉淀DNA，除去CTAB。 1.2适用范围及一些改良 由于CTAB提取法能够有效地去除多糖及酚类物质的沉淀，因而适用于从含酚类及糖类物质较高的植物材料中提取DNA。经研究发现CTAB提取法在落羽杉属树木、黑木相思、野生稻、野燕麦、枸杞、花生的DNA的提取中，相比较其他提取方法来说都是最好的提取方法。 为了缩短提取流程，提高提取质量，研究人员在传统方法的基础上，针对不同植物的特点，对一些提取步骤进行了改进。李先进［１］在对四种药用蕨类DNA提取的比较研究中发现，由于酚类物质极其容易被氧化，因此可以在最开始研磨材料的时候加入4%PVP，以防止研磨中细胞组织破裂后酚的氧化，从而获得更为理想的DNA。黄永莲［2］首先将材料在4℃放置1―2天，以便于其叶片中的多糖类物质的降解；然后在用CTAB处理的同时加入蛋白酶K，提高提取缓冲液中β-巯基乙醇用量，增加氯仿/异戊醇的量和使用次数，以及缩短异丙醇沉淀DNA的时间。用此改良的CTAB法提取菠菜和榕树叶片DNA，获得了良好的效果。袁燕［3］对蒜头果基因组进行DNA提纯的研究中发现，EDTA的浓度在20―30mmol/L时，提取DNA的效果较好，同时在提取的过程中，往研钵中加入少量PVP和VitC固体与蒜头果种仁共同研磨，不仅能阻止多糖、多酚氧化物等与DNA的结合和反应，而且能除去大部分油脂和杂质，可以大大提高DNA的纯度。 2.十二烷基磺酸钠（SDS）法 SDS提取法与CTAB提取法一样，也为常用的DNA提取方法。在DNA的提取过程中，有机溶剂的抽提效果及裂解液的裂解效果都是影响有机物质去除的先决条件，不同的有机溶剂和裂解液对于不同种类的植物DNA提取作用也有所差异。所以有很多植物比较适合使用SDS提取法对其进行DNA的提取。 2.1原理及方法 SDS是一种阴离子去污剂，它能够裂解细胞。使用氯仿等有机溶剂抽提蛋白质和糖类，并且用乙醇或异丙醇来沉淀DNA。SDS提取法提取流程和CTAB提取法一样。 2.2适用范围及一些改良 在对老芒麦的基因组DNA分离的研究试验中，李景环［１0］发现，SDS提取法是一种快速、简便、有效的基因组DNA小量提取法。另外，在一些研究中还发现，SDS提取法能替代操作过程较烦琐的大量法提取基因组DNA，从而给研究工作带来便利。 在毛白杨成熟叶片基因组DNA提取的研究中李继东［4］通过比较发现，SDS提取法是提取出质量高纯度高的毛白杨成熟叶片DNA的最佳方法，同时发现，如果将PVP添加到裂解液中，可以大大减少了试验的操作步骤，提取效果同样很好。另外也有研究发现，SDS高盐介质法又较常规SDS法省去了添加液氮研磨和水浴加热抽提等操作，可使得DNA提取试验的操作变得简便快速。 3.高盐低pH法 运用高盐低pH提取法对植物的DNA进行提取也较为普遍，此方法所用的试剂仅有无机盐和异丙醇，而醋酸钾又是常用的无机盐试剂。由于高盐低pH提取法没有反复抽提的过程，其所需要的试验材料也