脱氧核糖核酸电化学传感器的原理和其应用.pdfVIP

( ) 第 31 卷 分析化学 FENXI HUAXUE 　评述与进展 第 1 期 　 　　　　　　　　　　 　 　　　　　　　　　　 2003 年 1 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 110～115 脱氧核糖核酸电化学传感器的原理及其应用 陆晓军　鞠　先 (南京大学化学系 ,配位化学国家重点实验室 ,南京 210093) 摘 　要 　对电化学 DNA 传感器的组成及其在 DNA 损伤研究、环境污染监控、病原基因检测、基因疾病诊断和 药物机理分析等方面的应用进行了总结 ,并对其发展趋势进行了评述。 关键词 　电化学脱氧核糖核酸传感器,脱氧核糖核酸 ,评述 1 　引　　言 随着人类基因工程的迅速发展 ,传统的生化方法已不能满足需要 ,许多新的分析方法和检测器件应 运而生 ,DNA 传感器便是其中之一。DNA 传感器的基本原理是检测由 DNA 探针所提供的分子识别过 程 ,并通过一个换能器将检测结果转化为可识别信号。DNA 传感器种类很多 ,按换能方法分类 ,主要有 光纤荧光法[1 ,2 ] 、假布儒斯特角反射法[3 ] 、表面等离子共振法[4 ] 、压电共振法[5 ,6 ] 、石英晶体微天平法[7 ,8 ] 、 表面声波法[9 ,10 ] 、化学发光法[11 ,12 ] 、电位滴定法[13 ,14 ] 、阻抗谱法[15 ,16 ] 、电容法[17 ] 和伏安法[18～22 ] 等。其中 , 基于电化学换能方法的 DNA 传感器因其体积小、花费低和易微型化等特点而备受人们青睐。有关 DNA 传感器的评论文章近年来已有报道[23～26 ] 。1997 年翟俊辉等[23 ] 和朱滨等[24 ] 曾对DNA 传感器作过总结 , 庞代文等[25 ] 和彭图治等[26 ] 也分别对电化学 DNA 传感器的基本结构和性能作了评述。本文着重对电化 学 DNA 传感器的原理和应用研究进展进行综述。 2 　DNA 电化学传感器的原理 电化学DNA 传感器一般由一个固定 DNA 片段的电极和用于检测的电活性杂交指示剂构成[25 ] 。在 ( 适当条件下 ,利用两条互补的DNA 单链间的特异性相互作用 ,使电极表面上已知序列的DNA 片段 DNA ) ( ) 探针 与溶液中的待测序列 DNA 靶序列 发生杂交 ,通过杂交前后电活性指示剂的电化学响应的变化 进行测定 ;或使电极表面的靶序列与溶液中的已标记电化学活性物质的 DNA 探针杂交[27 ] 来测定靶序 列。在电极表面的 DNA 双螺旋结构形成后 ,该传感器还可用于检测那些与 DNA 双链有着特殊亲和力 的电活性小分子。 2. 1 　基底电极 有关核酸的电化学研究早在 40 多年前就已见报道[28 ,29 ] ,当时所使用的电极是滴汞电极。70 年代 , 悬汞电极[30 ,31 ] 和碳电极[32 ] 的使用使DNA 的电化学研究得以深入。80 年代末 ,Paleˇek 等利用核酸修饰汞 电极,将核酸伏安分析的灵敏度提高了几个数量级[33～37 ] 。核酸修饰汞电极主要利用DNA 在汞表面的 吸附进行痕量 RNA 、超螺旋DNA 及 DNA 损伤的检测[38 ] 。由于疏水性碱基与汞电极疏水性表面之间强 烈的相互作用 ,导致电极表面的 DNA 探针无法与靶序列杂交[39 ] , 限制了汞电极在核酸分析中的应用。 为了解决这个问题 ,人们将目光转向固体电极。常用于这一领域的电极为金电极和碳电极。Millan 等 在 1993 年就已利用玻碳电极获得了具有序列选择性的电