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超声辐射微泡剂对家兔卵巢血管影响[摘要]目的探讨低功率超声辐射微泡剂对家兔卵巢微血管的影响，为该方法在临床应用提供动物实验依据。方法30只生育期的家兔随机分为2个实验组(A、B组)和1个对照组(C组)，每组10只。对A、B组家兔一侧耳缘静脉注射微泡剂，然后以低功率低频率(20kHz，0.5w)超声照射家兔腹部的4个象限各120s，照射结束后在24h(A组)、7d(B组)解剖实验组家兔，同时解剖对照组(未行微泡剂注射及照射)家兔，取双侧卵巢，观察每组卵巢血管内血栓形成及微血管密度改变。结果 (1)超声干预后A、B两组家兔双侧卵巢血管内血栓形成率分别为(33.67±2.83)％和(2.96±0.80)％，对照组为O，A组与B、C两组比较有统计学差异(P＜0.05)；B、C两组比较无统计学差异(P＞0.05)。(2)超声干预后，A、B组微血管密度分别为11.00±2.83和24.00±4.80，对照组为27.00±3.09；A组与B、C两组比较有统计学差异(P＜0.05)；B、C两组比较无统计学差异(P＞0.05)。结论低功率超声辐射微泡剂对家兔卵巢正常微血管的影响是可逆的。 [关键词]低功率超声；微泡剂；微血管；栓塞；兔 [中图分类号]R737.31；R－33　[文献标识码]A　[文章编号]1671－7562(2007)04－0257－04 近年来，随着超声与微泡剂联合技术的研究发展，使超声在疾病的治疗方面得以迅速拓展，有专家预测，超声联合微泡剂治疗将可能成为一种全新的肿瘤治疗手段。其机制主要是通过超声辐射微泡剂产生“空化效应”，损伤肿瘤新生血管的内皮细胞，引起血管内血栓形成，阻断肿瘤血供，引起肿瘤组织坏死，延缓肿瘤生长。恶性肿瘤的生长需要形成满足生长需要的血管网，这一过程是由于肿瘤病灶释放大量血管生成活性因子如血管内皮生长因子(VEGF)所引起的。在此基础上病灶微血管密度(microvessel density，MVD)增加。在生理情况下，新生血管也见于卵巢、子宫、胎盘等处，而这一治疗方法对这些正常组织新生血管的影响，相关文献报道较少。为此，我们选择30只生育期的家兔，从其耳缘静脉注射微泡剂，以低功率超声照射卵巢区域，观察卵巢中微血管损伤情况，以探讨这一治疗方法对家兔卵巢微血管的影响。 1　材料与方法 1．1　材料 1．1．1　家兔由东南大学医学院实验动物中心提供，共30只，选择已生育过的雌性家兔，以确保卵巢功能正常，体重4－5kg。 1．1．2　仪器 NTY－300型多功能超声手术装置(江苏铁医美达康医疗设备厂提供)，输出功率0－100w；光学显微镜为日本产OLYMPUS。 1．1．3　微泡剂按张航等的方法配制。将维生素C和5％的碳酸氢钠按体积比1:1混和，加入等量706代血浆，混匀即可。配好后10min内注入家兔体内，否则重新配制。 1．2　方法 1．2．1　功率超声输出功率为0.5w。 1．2．2　分组30只家兔随机分为2个实验组(A、B组)和1个对照组(C组)，每组10只。 1．2．3　操作方法固定家兔使其腹部向上，剃去腹部兔毛后涂耦合剂，取一侧耳缘静脉注射微泡剂，然后超声照射，取腹部的4个象限作为照射点，各点照射时间120s。每组照射结束后做好标记，放回动物实验中心饲养，24h后解剖A组家兔，7d后解剖B组家兔，同时解剖C组家兔作为对照，取双侧卵巢，10％福尔马林固定，24h后制片作HE和免疫组化染色，观察卵巢MVD的变化。 1．2．4　免疫组化检查 将取出的卵巢按常规程序进行免疫组化微血管染色和MVD计数。免疫组化采用sP连接法检测。CD34第一抗体、鼠抗兔单克隆抗体、二抗抗鼠抗体和通用型SP试剂盒购自上海基因有限公司，免疫组化的步骤严格按照试剂盒说明书进行，以磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照。MVD的计算参考Weidner的方法：将切片置低倍镜(×100)全面观察，血管内皮细胞被染为棕色，选择4处血管密度最高区域，改用高倍镜(×200，每视野约0.74 mm2)观察，将任何一个被染的内皮细胞或内皮细胞丛作为一个血管，只要结构不相连，其分支结构也视为一个血管计，取5个视野微血管数的平均值。 1．3　统计学处理 应用SPSS11.5统计软件进行统计分析。卵巢血管内血栓形成率以x±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，MVD数据比较用X2检验，P＜0.05认为差异有统计学意义。 2　结　果 2．1　病理检查所见 超声干预后24h A组家兔卵巢血管HE染色可见血栓；继续饲养7d后解剖B组家兔见双侧卵巢血管内血栓退缩；对照组未见血栓；A、B组血栓形成率分别为(33.67±2.83)％和(2.92±0.80)％