组织培养技术简介及剖析.pptVIP

组织培养技术简介 组织培养基本概念 组织培养（Tissue Culture） 细胞培养（Cell Culture ） 器官培养（Organ Culture ） 组织培养 体外培养（In Vitro） 细胞培养 器官培养 4 对组织培养的评价 优点 能长时间直接观察活细胞的形态结构和生命活动 便于使用摄影、摄电影和闭路电视等方法进行记录，直接观察活细胞变化 可用培养进行研究的细胞广泛 便于使用不同的技术方法 细胞培养技术已是分子生物学和基因工程的重要组成部分 对组织培养的评价 易于施用物理、化学和生物因素等进行研究 是生物制品、单克隆抗体生产和基因工程制品等的生产手段 不足 人工培养环境与体内环境相比，仍有很大差异。因此在利用培养细胞做实验对象时，不应视为体内细胞完全一样，把实验结果推至体内，轻易做出与体内等同的结论 培养细胞生存环境、条件 无污染环境 温度 气体环境和氢离子浓度 体外培养细胞生存所需基本物质 渗透压 培养基 附着底物 体外培养细胞成功率的分析 培养成功与否的两步考虑 培养物是否贴附在底物上 扩大再培养 影响培养成功的因素 组织和细胞供体年龄 培养条件 贴附底物 培养方法 是否成功的两步考虑 培养物必须贴附在底物上 扩大再培养 影响培养成功的因素 组织和细胞供体年龄 组织培养设施和基本条件 实验室设计 原则 防止微生物污染和有害因素影响 要求 工作环境清洁、空气清新、干燥和无烟尘 划分不同功能区或用铝合金隔板隔开 无菌操作区应在室内较少走动的内侧 清洗和消毒安置在另室 41 组织培养设施和基本条件 无菌操作设施和工作间 净化工作台 侧流式 直流式 外流式 优缺点 延长滤垫使用寿命的方法 清洁无尘 纱布 滤器淤滞的检测 气流 酒精灯火焰 组织培养设施和基本条件 无菌操作室 更衣间 缓冲间 应适当宽敞，可设培养箱和离心机 操作间 大小适当 无菌操作室无日光直射，结构以铝合金为上，天花板不宜高过2.5M，上半部透明，墙壁光滑无死角 清洗和准备区 清洗区应与其它区分开 温育和贮存区 观察和研究区 组织培养设施和基本条件 实验室设备 CO2培养箱 质量关键在控温装置，温度变化一般不应超过0.5度 培养容器需与外界保持通气状态 箱内空气应保持干净，定期消毒（紫外灯、酒精） 水槽 组织培养设施和基本条件 电热干燥箱 烘干和干热消毒玻璃器皿 鼓风与升温同时进行，100度时可停止鼓风 禁止先升温后鼓风 100度以下时再打开箱门 金属器械、塑料制品、橡胶等不能在干燥箱内消毒 组织培养设施和基本条件 显微镜 水纯化装置 很少使用离子交换装置处理的水 蒸馏水装置分金属和玻璃两种 洗刷装置 人工洗刷 超声洗涤装置 玻璃吸管洗涤 组织培养设施和基本条件 抽滤装置 细胞冷冻贮存器 离心机 小型台式离心机符合分离细胞要求 加样器 46 组织培养设施和基本条件 器 械 解剖刀 白内障刀 解剖剪 虹膜剪 镊子 注意保护刀锋，钝刀对组织有伤害，不利细胞生长 组织培养设施和基本条件 培养器皿 玻璃瓶皿 玻璃瓶 500毫升、250毫升、100毫升 培养瓶 培养皿 吸管 离心管 组织培养设施和基本条件 塑料瓶皿 多孔培养板 4、6、24、96孔 培养皿 30、60、100毫米 培养瓶 培养用液 水 离子交换水 带有非离子物质和有机物，在组织培养中很少使用 蒸馏水 玻璃蒸馏器制备的三次蒸馏水 尽量减少开启次数 存放时间不宜过长，一般不要超过2周 最好现制现用 培养用液 平衡盐溶液 Hanks 配制离散细胞的消化液和洗涤液时，宜用钙、镁离子含量低的或无钙、镁离子的溶液 可配制成10×浓度的贮存液，用时稀释 高压灭菌，冰箱保存 浑浊或沉淀时，应重新配制 培养用液 血清 为何使用血清 血清的选择 国产杭州四季青 进口 同一品牌不同批号的产品存在差异 血清评价 培养用液 合成培养基 合成培养基的评价 有利于控制实验条件标准化 只能维持细胞不死，不能促进细胞增殖生长 种类