酶促反应动力学-吉林大学课程中心.PPT

主要内容： 酶促反应动力学 是研究酶促反应的速率以及影响此速率的各种因素的科学。 意义 研究酶的结构和功能 发挥酶催化反应的效率，寻找有利的反应条件 了解酶在代谢中的作用和某些药物的作用机制 一、化学动力学基础 化学反应热力学研究反应进行的方向、可能性和限度 化学反应动力学研究反应速率和反应的高效率。 各种化学反应的速率相差很大:有的瞬间完成(如爆炸反应、溶液中的离子反应；有的完成时间以分、时、日、年计算；还有更慢的反应，在有限的时间内无从察觉。 同一反应条件不同，反应速率也有很大差别。 另外还有许多化学反应，常有副反应同时伴随进行，也需要设法减少副反应的速率，而使主要的反应速率增大。 一、化学动力学基础 化学反应动力学（研究反应速率）的意义 理论上能够阐明化学反应的机制，了解反应的具体过程和途径。 实际应用上，可以根据反应速率来估计反应进行到某种程度所需的时间；也可以根据影响反应速率的因素进一步对反应进行控制。 一、化学动力学基础 (一)反应速率及其测定 反应速率 是以单位时间内反应物或生成物浓度的改变来表示。 一、化学动力学基础 (二)反应分子数和反应级数 1.反应分子数 2.反应级数 一、化学动力学基础 (三)各级反应的特征 1.一级反应 2.二级反应 3.零级反应 二、底物浓度对酶反应速率的影响 (一)中间络合物学说 二、底物浓度对酶反应速率的影响 (一)中间络合物学说 二、底物浓度对酶反应速率的影响 (二)酶促反应的动力学方程式 1.米氏方程式的推导 二、底物浓度对酶反应速率的影响 1.米氏方程式的推导 Km值的物理意义 Km值是当酶反应速率达到最大反应速率一半时的底物浓度。单位是mol/L,与底物浓度的单位一样。 当[S] 远远小于Km值时，反应速率与底物浓度成正比 当[S]远大于Km值时，反应速率已达到最大反应速率，这时酶全部被底物所饱和，v与[S]无关，符合零级动力学。 当[S]=Km值，反应速率等于最大反应速率的一半。 二、底物浓度对酶反应速率的影响 2.动力学参数的意义 (1)米氏常数的意义 Km值是酶的特性常数 Km值只与酶的性质有关，与酶浓度无关。 Km值可以判断酶的专一性和天然底物。 若已知某个Km值，就可以计算出在某一底物浓度时，其反应速率相当于反应速率的百分率。 Km值可以帮助推断某一代谢反应的方向和途径 (2)Vmax和k3(kcat)的意义 在一定酶浓度下，酶对特定底物的Vmax也是一个常数。K3表示当酶被底物饱和时每秒种每个酶分子转换底物的分子数，这个常数又叫做转换数，通称为催化常数(catalytic constant,kcat)。 二、底物浓度对酶反应速率的影响 (3)kcat/km的意义 由kcat/km值的大小，可以比较不同酶或同一种酶催化不同底物的催化效率。 3.利用作图法测定Km值和Vmax值 (1)Lineweaver-Burk双倒数作图法 二、底物浓度对酶反应速率的影响 (2)Edie-Hofstee作图法 (2)Edie-Hofstee作图法 二、底物浓度对酶反应速率的影响 (3)Hanes-Woolf作图法 二、底物浓度对酶反应速率的影响 (4)Eisenthal 和Cornish-Bowden直接线性作图法 二、底物浓度对酶反应速率的影响 (三)多底物的酶促反应动力学 1. 酶促反应按底物分子数的分类 单底物、双底物和三底物 二、底物浓度对酶反应速率的影响 2.多底物按动力学机制分类 (1)序列反应或单-置换反应 底物的结合和产物的释放有一定的顺序，产物不能在底物完全结合前释放。 E+A+B→AEB→PEQ→E+P+Q ①有序反应 A定为领先底物，在结合B前首先与酶结合，在缺乏A时B不能结合自由的酶。反应在A和B之间产生三　　　　　　　元复合物，随后有序的释放反应产物P和Q。 二、底物浓度对酶反应速率的影响 ②随机反应 两个底物随机结合，两个底物随机释放。限速步骤是反应AEB→QEP 二、底物浓度对酶反应速率的影响 (2)乒乓反应或双-置换反应 酶同A的应物产物P是在酶同第二个底物B反应前释放出来。 二、底物浓度对酶反应速率的影响 3.双底物反应的动力学方程 (1)乒乓机制的动力学方程和动力学图 式中：[A]、[B]分别为底物A和B的浓度，KmA是在Ｂ的浓度达饱和浓度时底物Ａ的米氏常数、 KmB在A的浓度达饱和浓度时底物B的米氏常数,Vmax是指[Ａ]、[B]都达到饱和浓度时的最大反应速率。 二、底物浓度对酶反应速率的影响 3.双底物反应的动力学方程 (2)序列机制的底物动力学方程和动力学图 式中：[A]、[B]分别为底物A和B的浓度，KmA是在Ｂ的浓