生物检测技术113Kb.PPT

第九章 生物检测技术 采用生物体对被检测物质的特有反应而鉴定被检测物质的质量和功效的方法。 生物体主要是各种微生物和某些动物。 检测范围：生物效价和安全性实验 一 生物检测的主要内容 生物检测常用标准样品对照法 国际标准样品——联合国世界卫生组织生物检定委员会，丹麦哥本哈根血清所，伦敦国家医研所 国家标准（参考标准）——本国制备，用国际标样校合，北京药品与生物制品研究所 实验室对照样品——本室制备，要与国家标样、国际标样校合 1 生物效价测定 效价：指某一物质引起生物反应的功效单位，可用理化方法检测，也可用生物检测方法测定。 生物法：各类抗生素，维生素及氨基酸等生长因子。 一个青霉素效价单位：能在50mL肉汤培养基中完全抑制金色葡萄球菌发育的最小青霉素剂量。 一个链霉素效价单位：能在1mL肉汤培养基中完全抑制大肠杆菌发育的最小链霉素剂量。 国际标准单位IU，对纯的化学物质，可用重量来表示，如1mg链霉素能抑制1000mL培养基中大肠杆菌的繁殖，则含有1000IU，1IU=1μ g 2 安全性试验 （1）毒性试验：常用动物进行实验 LD50 （2）局部刺激性试验 将被检药物注射进动物体内，观察在注射部位是否出现炎症或产生过敏反应等局部刺激现象。 阳性——不能临床使用 阴性——可供临床使用 （3）溶血实验 检测药物是否引起红血球膜破裂而释放出血红蛋白 （4）热原试验 检测药物中有没有使动物体温升高的致热性物质存在 一般用家兔试验 （5）过敏试验 检测药物中有无引起过敏反应的物质存在的一种方法。 过敏反应 致敏原 一般豚鼠或雄性小白鼠试验 （6）变异原试验 检测药物或食物中有没有引起生物产生变异的物质（变异原）存在。可用动物和微生物检测。 二 抗生素的生物检测（生长抑制剂生物效价检测） 有些可以用化学检测或光学检测法进行检测，广泛采用生物检测法。 利用抗生素对特定微生物的生长起抑制作用而进行检测的技术。 可用于已知抗生素的效价测定，也可用于检出未知的抗生素。 方法：稀释法，扩散法 1 稀释法 将样品和标准抗生素分别进行不同稀释度的稀释，加入培养基中，用指定的适当的菌株接种，培养后比较微生物的生长情况，从而测定样品的效价。 固体平板，接入相同量指示菌，比较生长菌落数； 液体培养基，接入相同量指示菌，比较OD值。 还可测抗生素的最低抑菌浓度和半致死剂量LD50 2 扩散法 利用扩散作用形成连续的浓度梯度，试验菌在最低抑菌浓度范围内生长受阻，形成抑菌圈，从抑菌圈直径测定抗生素效价。 用标准品作对照，选择在试验菌最适生长条件下培养。 （1）纸片－平板法（纸碟法） （2）圆筒－平板法（管碟法、杯碟法） 应用最广泛的生物检测法 双层平板 标准曲线或计算得到样品效价 （3）双层试管法 试管含试验菌及指示剂美蓝（最终浓度1ppm）琼脂培养基，垂直放置，加入标准液和样品液，培养后测定蓝色抑菌带高度，利用标准曲线可得样品效价。 （4）生物生长图谱法 样品液进行纸层析，层析后风干平铺在含试验菌平板上，4℃ 几小时，取去滤纸，37 ℃16～18h，得到生长图谱，可检测样品中的抗生素或抑菌物质种类，并可得Rf 也可用薄层层析分离后测定 三 生长促进物质的生物检测 生长促进物质：对生物生长繁殖有促进作用或不可欠缺的物质，如维生素、氨基酸、激素等。 一般以微生物为试验材料 方法： 1 生长抑制物质生物检测方法均可用于生长促进物质的检测 全合成培养基（不含待测物 ） 结果通过长菌直径或长菌高度而测定 2 比浊法 采用适宜菌株和限量全合成液体培养基加不同浓度待测样品，37 ℃，18～24h，测定OD，与标准曲线对照，查浓度 3 滴定法 在以乳酸菌为试验菌的场合，随着菌生长而生成乳酸，一定范围内生成乳酸的量与添加的生长促进物质的量成正比。 培养结束后，用0.05 mol/L或0.1 mol/L NAOH滴定，与标准曲线对照 思考题 生物检测内容主要有哪些？安全性检测包括哪些内容？ 如何测定生物生长抑制物质和生长促进物质的效价？注意测定效价时的注意事项。 名词解释 LD50、效价、过敏反应、变异原、热原、致敏原、溶血试验、局部刺激性试验 * *