组织芯片.PPT

Capture Arrays Sandwich Immunoassays highly parallel high sensitivity expensive equipment labour intense automation difficult Reverse Phase Protein Microarrays 四、悬浮微球芯片 组织芯片（意义） 组织芯片（国内外现状） 药物筛选流程 * 蛋白质和组织芯片 一、蛋白芯片的基本原理 蛋白质芯片是指在固相支持物上有序排列的各自独立的多肽、蛋白或相应配体，利用蛋白质与蛋白质、蛋白质与DNA、蛋白质与RNA，或与其它配体间的相互作用，同时平行分析大量蛋白质的生物化学性质，在蛋白质组学基础研究以及临床诊断、药物研究、环境监测、食品卫生等方面有广阔的应用前景。 Immobilization Capture Detection 蛋白质芯片原理示意图 二、蛋白质芯片（Protein Microarray)的分类 Interaction Arrays —— Proteins on Chip- Labelled Sample Caputure Arrays —— Antibody on Chip-Labelled Sample μELISA on Array —— Miniaturised Sandwich Assays Reversed Phased Arrays —— Multitude of arrayed Samples Interaction Arrays -Cloning and expression of 6600 yeast protein -Complex arrays for protein-protein interaction studies Zhu et al. (2001)Science.293,2101 SAMPLE ARRAYS Reverse Phase Screen ANTIBODY ARRAYS Sample Labelling Approaches ANTIBODY ARRAYS Mutiplexed Sandwich ELISAs YYYYYY Forward Phase Detection Antigen Reverse Phase Detection Capture Molecules Immobilized Antigen Capture Molecules Y Y Y Y 三、蛋白质芯片的制备 （一）、基质材料的选择和处理 聚丙烯酰胺凝胶 聚偏二氟乙烯膜（PVDF） 硝酸纤维素膜 载玻片 硅片 纸 金等 微珠 固定蛋白的方式包括吸附、共价结合、分子组装等 （二）、蛋白芯片的点样 制备好的蛋白通过使用DNA芯片中成熟的机械针点样系统或是微量液体分配系统实现。也可以通过原位合成的方法制备。 值得注意的是蛋白的粘稠度比较高，选择点样针的时候，需要针的孔径大一些。 （三）、蛋白芯片的检测 荧光，同位素标记方法，原子力显微技术，表面等离子体共振技术， 多光子检测技术，基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF/MS), 表面增强激光解吸附作用/离子化技术(SELDI) Bead Types Assigned Unique Color Code Proprietary technology (xMAP) sold only by authorized Luminex licensees Ratio of two fluorescent “classification” dyes results in unique spectral signature Enables mixing of multiple bead sets with different dye ratios/signatures Concentration of Classification Dye 1 Concentration of Classification Dye 2 Protein Array Assay Images Control Sample Treated Sample 高通量 多组织标本 同时、平行分析 同时研究一个或多个基因或蛋白的研究工具 高质、高效，省材，操作便捷 应用广泛 FISH（荧光原位分子杂交） mRNA ISH（原位杂交） IHC（免疫组织化学） 成百甚至上千份 正常或处于疾病状态 疾病不同发展阶段