WST 571-2017 裂头绦虫幼虫检测.pdf

ICS 11.020 C 62 WS 中 华 人 民 共 和 国 卫 生 行 业 标 准 WS/T 571—2017 裂头绦虫幼虫检测 Detection of diphyllobothroid larvae 2017 - 08 - 01 发布 2018 - 02 - 01 实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 发 布 WS/T 571—2017 前 言 本标准依据GB/T 1.1 －2009给出的规则起草。 本标准起草单位：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、上海出入境检验检疫局、上海市疾 病预防控制中心。 本标准起草人：陈韶红、李树清、张小萍、许学年、卢艳、蔡玉春、张永年、李浩、艾琳、郑彬。 I WS/T 571—2017 裂头绦虫幼虫检测 1 范围 本标准规定了裂头绦虫幼虫检测的操作流程。 本标准适用于各级疾病预防控制机构、医疗机构和食品检测机构对鱼、蛙和蛇中裂头绦虫幼虫的检 测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 18088 出入境动物检疫采样标准 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 裂头蚴plerocercoid larvae 裂头绦虫的幼虫，是假叶目（Pseudophyllidea）、裂头科（Diphyllobothriidae）绦虫第三期幼 虫的总称 （参见附录A）。 3.2 阔节裂头蚴plerocercoid larvae of Dibothriocephalus latus 或phyllobothrium latum 寄生在鱼体内阔节裂头绦虫的第三期幼虫。 3.3 曼氏裂头蚴plerocercoid larvae of Spirometra mansoni 寄生在蛙、蛇或人体内曼氏迭宫绦虫的第三期幼虫。 4 仪器器材 1 WS/T 571—2017 4.1 生物显微镜。 4.2 体视显微镜。 4.3 PCR 扩增仪。 4.4 电泳仪。 4.5 凝胶成像系统。 4.6 超净工作台。 4.7 高速离心机。 4.8 解剖用手术器械。 5 试剂材料 5.1 试剂 胃蛋白酶消化液；Tris-乙酸电泳缓冲液（TAE）；琼脂糖凝胶；6×加样缓冲液；100～2000 bp DNA marker；灭菌双蒸馏水(ddH O)；70%乙醇（配制见附录B 的B.1）。 2 5.2 引物 扩增裂头蚴核糖体DNA 转录间隔区（ITS）引物序列；扩增裂头蚴细胞色素C 氧化酶（Cox1）引物序 列；阔节裂头蚴特异性引物序列及曼氏裂头蚴特异性引物序列（见附录B 的B.2）。 5.3 阳性对照 阳性对照为裂头绦虫相应基因片段的阳性克隆质粒或裂头蚴、裂头绦虫全基因组DNA。 6 检测步骤 6.1