实验四DNA浓度测定及酶切课件.pptx

实验三、DNA浓度测定及酶切;1、学习利用紫外分光光度法测定DNA溶液浓度和纯度的原理和方法 2、学习利用琼脂糖凝胶电泳测定DNA浓度的方法 3、学习利用限制性内切酶切割DNA的方法，并通过电泳检测酶切的效果，为以后的连接作准备。 ;DNA的吸收光谱峰在260 nm处，测定此波长下DNA溶液的OD值，当OD260=1时，双链DNA含量约为50 ?g/ml，据此可用紫外分光光度计测定溶液中DNA含量。由于蛋白质的吸收峰在280 nm处，在测定DNA含量时，还常计算OD260/OD280之值，如该值为1.8-2.0时，认为已达到较高的纯度，如低于此值，表明其内含杂质较多，可能影响酶切反应。 目前已发现I型、II型和III三类不同的限制性内切酶，其中II型能专一识别碱基顺序，并在该处切断双链DNA，因而在基因工程中得到广泛应用。DNA经限制性内切酶作用产生两种断裂状态：粘性末端或平末端。限制性内切酶Hind III识别的碱基序列为： 酶切反应需Mg2+及其它一些辅助离子和一定的盐离子浓度，不同内切酶对盐离子有不同的要求，如盐离子浓度使用不当或甘油含量过高(5%)，会使酶的识别位点发生改变，产生星活性(star activity)。绝大多数酶的反应温度37℃，也有个别要求在50 ~ 65℃。;不同核酸样品在OD260=1时的浓度;不同核酸样品在OD260=1时的浓度;;四、仪器设备;Nan