若干斑马鱼转基因品系的建立和其初步功能研究.pdf

密级 学校代码 !Q5垒2 学号2Q!!Q21生1222 若干斑马鱼转基因品系的建立及其初步功 能研究 Establishmentofzebrafish strains transgenic and studiesontheirfunctions preliminary 指导教师姓名、职称 亚重型丝撞爰羞当墼蕉 湖南师范大学学位评定委员会办公室 二零一四年四月 摘 要 心脏形成是一个错综复杂的过程，信号途径与转录因子和粘附分 子对心脏细胞增殖、分化，心脏细胞的多样性以及不同心脏细胞的形 态发生起调控作用。通过构建心脏组织高表达基因启动子和增强子的 转基因品系来确定基因的生物学功能，对理解心脏发育的机制和发展 有效地治疗手段奠定了理论基础。 GFP和RFP可在不同物种中作为活体报告基因，真实地追踪基 因的表达和蛋白质的定位，，因此可用于研究基因对心脏发育的调控 功能。T012是发现于青鲻中的一个鱼源转座系统，利用T012转座酶 系统构建转基因斑马鱼品系能显著提高转基因成功的效率，该T012 转座子系统为斑马鱼心脏发育候选基因的功能研究提供了很大方便。 HDGC3基因是本研究室筛选鉴定的一个在心脏和肌肉中高表达 的心脏发育候选基因。本室前期研究结果表明HDGC3在斑马鱼的心 脏和肌肉组织中有高水平的表达，为了进一步研究HDGC3在心脏发 育过程中的功能，本文基于T012转基因技术，建立了若干心脏转基 因斑马鱼模型。我们分别利用斑马鱼cmlc2和Titin启动子构建了转 例混合注射到斑马鱼一细胞期受精卵中，在荧光显微镜下筛选鉴定出 有绿色荧光表达的胚胎，建立了稳定遗传的HDGC3斑马鱼转基因品 步分析了在转基因斑马鱼品系过表达HDGC3对心脏发育的影响；同 时，我们克隆了HDGC3基因启动子序列，利用该启动子序列建立了 果表明：HDGC3基因在斑马鱼胚胎发育早期的心脏和肌肉表达。这 些转基因斑马鱼实验模型的建立对于研究HDGC3基因在一t5脏发育中 的功能具有重要意义。 关键词：心脏发育， cmlc2，HDGC3，Titin，转基因斑马鱼 II ABSTRACT The ofheart is signaling process developmentcomplex．Some factorsandadhesionmolecules the pathways，transcription regulate andthe ofheart proliferation，differentiation，thediversitymorphogenesis toresearchthe buildsome zebrafishmodels cells．We transgenic functionsof which inhearttissues．ItCan biological genes highlyexpress atheoreticalfoundationfor themechanismofheart lay under