第二次试验课程－食物中之胆固醇定量.PPTVIP

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2017-08-14 发布于天津
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第二次试验课程－食物中之胆固醇定量

第二次實驗課程－食物中之膽固醇定量實驗原理利用酵素反應法使樣品中的 cholesterol ester 經 cholesterol esterase 及cholesterol oxidase 反應後變成4-cholesten-3-one 及 H2O2，而所生成之 H2O2 會與4-amino-antipyrine 藉由 peroxidase 的作用生成red quinone，可於500nm下測其生成量。其反應式如下: cholesterol ester＋H2O ------------------- cholesterol＋fatty acid cholesterol esterase cholesterol oxidase cholesterol＋O2 ------------------------4 quinone＋4 H2O-cholesten-3-one＋H2O2 H2O2＋phenol＋4-amino-antipyrine ---------------red peroxidase 實驗藥品 Calibrator (standard) 200mg/dl Working reagents: PIPES buffer pH6.9 40 mmol/l Phenol 24 mmol/l Peroxidase 100 U/l Cholesterol esterase 250 U/l Cholesterol oxidase 200 U/l 4-amino-antipyrine(4-AA) 0.05 mmol/l 實驗步驟將A、B及C於水浴37℃下5分鐘，再分別於500 nm下測量其吸光值。所得之個別吸光值帶入公式計算後，可得知樣品之膽固醇含量（mg/dl） A B C Reagent blank (μl) Standard (μl) Sample (μl) DH2O 10 - - Standard - 10 - Sample - - 10 Reagent 1000 1000 1000 計算公式 OD of unknown Conc. of unknown＝---------------------- × Conc. standard OD of standard