荧光光度法测定-武汉大学化学试验教学中心.DOCVIP

荧光光度法测定复方阿司匹林中阿司匹林的含量 闵阗訚 陈杜刚 孙飞 钱江锋 罗虎 （武汉大学化学与分子科学学院 湖北 武汉430072） 【摘要】：采用荧光光度法测定阿司匹林的水解产物水杨酸的荧光强度，由标准物水杨酸的工作曲线求得片剂中阿司匹林的含量。测量前需寻找阿司匹林的最佳水解PH。 【关键词】：阿司匹林 水杨酸 荧光光度法 1．前言 阿司匹林是一种历史悠久，应用广泛的退烧药物。其主要成份是乙酰水杨酸，片剂中乙酰水杨酸的含量既是药物质量的主要指标，也是医生处方的重要依据。为了控制其含量，必须对产品进行严格的纯度检验。大部分检测方法仍沿用碱加速水解酸回滴的方法，这种方法取样量大，误差大。本实验利用阿司匹林水解物水杨酸的荧光特性，采用荧光光度法测定，取样量小，简便快速，灵敏度高，结果准确可靠。 2．实验部分 2．1 主要仪器和试剂 荧光光度计，磷酸氢二钠，磷酸二氢钠，复方阿司匹林片剂，水杨酸，蒸馏水。 2．2 实验步骤 2．2．1 荧光光谱扫描 精确称取标准物水杨酸10mg,用少量蒸馏水溶解后转入100mL容量瓶中，稀释至刻度，摇均作为贮备液。取该液作适当稀释后进行激发光谱和发射光谱的扫描，最大激发波长为303.0nm，最大发射波长为408.0nm。如图1,2所示。在以下步骤中固定激发波长为303.0nm不变，扫描不同酸度条件下的最大发射波长的强度。 图1 图2 2．2．2 酸度对荧光强度的影响 2．2．2．1各种浓度缓冲液的配制： 分别准确称取磷酸二氢钠(a) 0.1560g和磷酸氢二钠(b)0.3580g,配成浓度均为 0.01 mol/L的溶液各100ml,作为缓冲液贮备液。已知磷酸的Ka2=6.31*10-8，所以两贮备液的浓度比与缓冲液PH关系式为PH =PKa2 –lg(Ca/Cb),代入数据即为PH=7.2-lg(Ca/Cb),根据该式配得以下缓冲液： PH 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 Ca/Cb 5.01 1.58 0.50 0.16 0.05 2．2．2．2确定最佳PH： 取适量水杨酸贮备液，分别加入5mL上述缓冲液，定容，摇均后分别在每个PH值下进行荧光发射光谱扫描(固定激发波长为303nm)。绘制各PH下的发射光谱扫描曲线，如以下图3，4，5，6，7所示。 图3 图4 图5 图6 图7 下表列出了在激发波长303nm下，每一PH下的最大发射波长及该波长下的强度: PH 最大发射波长(nm) 强度 6.5 406.0 76.455 7.0 405.0 74.690 7.5 408.0 77.396 8.0 414.0 75.831 8.5 402.0 76.965 由表中数据知,在PH=7.5时荧光有最大响应值,且该PH下的最大发射波长为408nm。故将发射波长定为408nm,缓冲液定为PH为7.5的磷酸氢二钠与磷酸二氢钠混合物。 2．2．3 标准曲线的绘制 分别准确量取水杨酸贮备液0.8,1.0,1.2,1.4,1.8mL于50mL容量瓶中，加入PH=7.5的缓冲液10mL，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀。以该缓冲液为空白，分别测量一系列标液的荧光强度，作出工作曲线，如图8所示。 图8 2．2．4 样品测定 2.2.4.1样品的配制: 准确称取样品25mg,研细，置于250mL 容量瓶中, 加水25mL ,加0.1mol/ L 氢氧化钠溶液25mL , 置沸水浴中水解10min , 放冷至室温,再加入0.1mol/L稀硫酸25mL ,用缓冲溶液定容至刻度。将溶液过滤后移取0.8ml至25ml容量瓶，加入10ml缓冲溶液后用蒸馏水定容。 2.2.4.2荧光强度的测定: 对样品进行荧光强度测定,得数据如下表所示: 测量次数 待测液浓度 荧光强度 1 1.1131 88.42 2 1.1135 87.03 3 1.1047 86.37 4 1.1079 86.61 5 1.0999 86.01 6 1.1147 87.12 考虑阿司匹林完全水解,则复方阿司匹林中阿司匹林的质量含量为45.19%。 2．3 结果与讨论 1.对水杨酸的激发波长及各个PH下发射波长进行扫描知其最大激发波长为303nm，在有最大荧光强度的PH=7.5时的最大发射波长为408nm,以此为实验条件，可得最大灵敏度，减小误差，整个实验过程中都应保持这一条件。 2.考虑酸度对荧光强度的影响。在按理计算结果配制成各PH值的缓冲液后，用精