萃取橘子皮的酯化酵素进行位置专一的酯水解反应.PDFVIP

萃取橘子皮的酯化酵素 進行位置專一的酯水解反應 一、實驗目的 ： 酵素催化在有機合成課程中是很重要的課題 ，由於酵素催化反應 具高轉換率及高度立體專一的特性 ，近年來普遍用於不對稱合成，且 已獲致相當好的結果 ，使得仿生合成儼然成為有機合成的一種新潮 流。本實驗以橘子皮分離出來的酯化酵素 ，進行位置專一性的酯水解 反應 ，並觀察其活性，使學生能學習從天然物萃取出的酵素，進而對 酵素催化的原理有一定的認識 。 二、實驗方程式 ： O O O C O C CH3 + CH3OH O C H O 2 HO C O CH3 or H CO Orange peel O O 3 esterase C OH + C H CO HO CH3 3 三、實驗原理 ： 酵素催化反應依所使用的酵素類型可區分為: 1、氧化還原酵素（Oxidoreductases ） 2 、傳遞酵素（Transferases ） 3 、水解酵素 （Hydrolases ） 4 、分解酵素 （Lysases ） 5 、異構酵素 （Isonerases ） 6 、結合酵素 （Ligases ） 酵素的活性可藉測量其化學變化而測定之 ，如連續追蹤反應過 程，可發現反應速率很快降低 ，可能由於受質與生成物的平衡，pH 值 改變或生成物對酵素的抑制 。 1溫度的影響 ： 溫度每增 10℃，約可使反應速率增加一倍 ，但也使酵素因變性而致失 去活性 ，在此情形下，最適溫度決定於反應時間。 2pH 值影響 ： 酵素的接觸活性在一狹窄的 pH 範圍 ，大部分酵素的最適pH 值在 5~7 間，在此 pH 值下呈最穩定狀態 ，一般以緩衝溶液控制其pH 值穩定 。 3受質的影響 ： 在固定條件下 ，反應速率決定於酵素與受質的濃度 ，Michaelis Menten 假定酵素 （E ）與受質 （S ）先形成一複合 （ES ），然後再轉 變成生成物與酵素 。 E + S → ES → P + E 以豬肝酯化酵素 （PLE ）為例 ，受質先與酵素的活性位置結合形成複 合 ，再由其上的親核基攻擊完成水解。圖一為豬肝酯化酵素 （PLE ） 的 Serine 活性位置 ， ＊ PLE （豬肝酯化酵素）之立體專一性: HL ：大的親水性結合點 Ser PB HS ：小的親水性結合點 HL HS PF ：前端極性基結合點