【2016年】分枝杆菌计数方法的比较研究【医学论文】.docVIP

医学论文-分枝杆菌计数方法的比较研究 ????????????? 【关键词】? 紫外分光光度计法；湿重法；平板菌落计数法；标准曲线；牡牛分枝杆菌 　　Comparative study of Mycobacterium counting methods 　?? 【Abstract】 AIM: To build up a fast counting method for Mycobacterium vaccae (M. vaccae). METHODS: We counted M. vaccae by UV spectrophotometry, wet weight measurement and plate count method, and built up two standard curves. One was drawn according to the results of UV spectrophotometry to plate count and the other was humid weight to plate count. RESULTS: We built up two standard curves with the results of UV spectrophotometry and wet weight, to plate count, respectively. The analysis of accuracy rating proved that there was an approximal linear correlation between the two standard curves ranging from 105/mL to 108/mL. CONCLUSION: The method is? dependable, and can be used for quick counting of M. vaccae. 　　【Keywords】 UV spectrophotometry; wet weight measurement; plate count; standard curve; Mycobacterium vaccae 　　【摘要】 目的： 建立牡牛分枝杆菌的快速检测方法.? 方法： 采用紫外分光光度计法、测湿重法、平板菌落计数法测定细菌数，建立紫外分光光度计法、测湿重法对平板菌落计数法的标准曲线. 结果： 建立了紫外分光光度计法和湿重法相对于平板计数法的标准曲线，通过准确度分析表明在细菌含量在每毫升105～108之间时，两标准曲线线性关系良好. 结论： 该方法可用于牡牛分枝杆菌的快速计数. 　　【关键词】 紫外分光光度计法；湿重法；平板菌落计数法；标准曲线；牡牛分枝杆菌 　　0引言 　　结核病目前仍是严重危及全球的公共卫生问题之一. 据世界卫生组织估计［1］，当前全球约有20亿人受结核分枝杆菌感染，我国近5亿人感染. 因此，结核病的研究已成为传染病研究的热点之一. 在科研工作中，如进行转化、毒株攻击等时，需要即时检测细菌的浓度范围. 但分支杆菌的生长较慢，用普通的平板计数法进行计数，不能满足时效性. 因此，找到一种快速计数分支杆菌的方法，将为科研提供极大便利. 牡牛分支杆菌是一种快速生长型分支杆菌，广泛应用于结核病的发病机理和疫苗研究中. 本文研究紫外分光光度法、测湿重法和平板计数法间的关系，绘制紫外分光光度计法和测湿重法标准曲线，建立能快速计数的方法. 　　1材料和方法 　　1.1材料紫外分光光度仪（JENWAY 6405 UV/Uis Spectorophotometer）、电子天平，离心机（eppendorf centrifuge 5415 D）, 牡牛分枝杆菌（由微生物教研室保存）；LB培养基，每200 mL含NaCl 2 g、营养粉2 g、酵母提取物2 g，固体培养基加入琼脂粉3.5 g；7H9培养基（DIFCO）.? 　　1.2方法 　　1.2.1紫外分光光度计法测吸光度用接种环在从分枝杆菌菌种中取一环菌，接种到5 mL LB培养基中. 置于37℃摇床中振荡培养约24 h，使细菌活化. 测吸光度值，当吸光度值＞0.6时将细菌按1∶100的比例转接到200 mL LB培养基中扩大培养，置于37℃摇床中振荡培养. 每隔3 h在超净工作台中用无菌移液枪从培养基中吸取5 mL菌液，于无菌短中管中，其余菌液放入摇床中继续培养. 用1 mL一次性注射器将短中管中菌液反复吹打，充分重悬，使聚集生长的细菌充分混匀. 取6个5 mL离心管，每管加入去离子水2 mL分别标记1～6待用. 从混匀后的菌液中取1 mL，用离心机离心，11 000 g, 1 min，收