分子生物学试题工科.docVIP

分子生物学思考题： 一、名词解释： 基因座位（Gene locus）：指各个基因在染色体上所占的位置。也可简称为座位。但就位点的实体而言，指的就是基因。是指同一位点 (locus) 上的两个等位基因相同的基因型个体，即遗传因子组成相同是指同一位点上的两个等位基因不相同的基因型个体 指在野生群体中观察到的最高频率的表型，或具有这种表型的系统、生物和基因。 即生物体的性状出现突变的个体、细胞或病毒粒子，称为突变型，也有人把发生了突变的基因本身称为突变型的，根据变化的性状可以将突变型分为形态突变型、代谢突变型和行为突变型等。可以插入核酸片段、能携带外源核酸进入宿主细胞，并在其中进行独立和稳定的自我复制的核酸分子。经无性繁殖获得基因许多相同拷贝的过程。通常是将单个基因导入宿主细胞中复制而成。是细菌拟核裸露DNA外的遗传物质，为环形闭合的双股DNA,存在于细胞质中，质粒编码非细菌生命所必须的某些生物学性状，如性菌毛、细菌素、毒素和耐药性等。指 lacZ 基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的 β-半乳糖苷酶（β -galactosidase ，由 1024 个氨基酸组成）阴性的突变体之间实现互补。某一特定来源DNA通过细胞-DNA克隆技术构建呈含有所用DNA片段的重组DNA分子，并转化至细菌内，构成DNA文库。细菌学家们曾研究过在实验室中生长的两种不同的肺炎球菌菌株，一种有平滑的外膜（S），一种没有外膜，外表粗糙（R），显然R菌株缺少某种构成这种碳水化物被膜的酶。同时发现，如果将S菌株的浸出物与R活菌株相混合，注射于小鼠，小鼠的组织中就会含有S活菌株。S浸出物（完全是非活性的）显然含有一种因子，能够供给R菌株以所需要的酶，并将之转变成S菌株。大家都认为这种因子本质上是蛋白质。然而在1944年艾弗里及共同事研究了S菌株浸出物，证实这种因子是纯粹的脱氧核糖核酸（DNA），并不存在蛋白质。这是一个关键性发展，在此以前，一直认为蛋白质是遗传学的基础，而DNA只是蛋白质的一种不怎么重要的附属品。现在看来DNA才是真正的遗传学基础。这一发现直接导致了对DNA的新的钻研，使克里克和沃森发现了它的结构及其复制方式。 3.原核生物启动子五个保守区域的特点？启动子是DNA链上一段能与RNA聚合酶结合并能起始mRNA合成的序列，它是基因表达不可缺少的重要调控序列。没有启动子，基因就不能转录。原核生物启动子是由两段彼此分开且又高度保守的核苷酸序列组成，对mRNA的合成极为重要。启动子区域： （1）Pribnow盒，位于转录起始位点上游5—10bp，一般由6～8个碱基组成，富含A和T，故又称为TATA盒或—10区。启动子来源不同，Pribnow盒的碱基顺序稍有变化。 （2）—35区，位于转录起始位点上游35bp处，故称—35区，一般由10个碱基组成。 启动子有强弱之分，虽然原核细胞仅靠一种RNA聚合酶就能负责所有RNA的合成，但它却不能识别真核基因的启动子。为了表达真核基因，必须将其克隆在原核启动子的下游，才在原核表达系统中被转录。在原核生物表达系统中，通常使用的可调控的强启动子有lac (乳糖启动子)、trp (色氨酸启动子)、PL和PR(λ噬菌体的左向和右向启动子)以及tac（乳糖和色氨酸的杂合启动子)等。 引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。 产物不能形成二级结构。 引物长度一般在15~30碱基之间。 G+C含量在40%~60%之间。 碱基要随机分布。 引物自身不能有连续4个碱基的互补。 引物之间不能有连续4个碱基的互补。 引物5′端可以修饰。 引物3′端不可修饰。 引物3′端要避开密码子的第3位。DNA分子需要具备哪4个条件？①具复制原点(ori),在宿主细胞中不仅能独立地自我复制,而且能带动携带的外源DNA片段一起复制。具有多个克隆位点(multiple cloning site,MCS,或称polylinker region),即具有多种限制性酶的切点,而每一种酶的切点只有一个,用于克隆外源DNA 片段。这些酶切位点不存在于复制原点或抗性选择标记基因内,以保持载体的自主复制特性及表型标记性状。至少具有一个选择标记基因,这个基因通常是抗菌素的抗性基因或某种酶的基因,而宿主细胞则没有这种基因,使有或无载体的宿主细胞具有易鉴别的表型。易从宿主细胞中吸收。(1) Ti质粒具有5个主要功能区域 。它们分别是T-DNA、质粒转移 (plasmid transfer)、冠瘿碱代谢 (opine catabolism)、复制原点 (oir)和毒性区域 (vir)。(2)T-DNA中直接参与转移并整合到植物染色体上的序列，仅是T-DNA两端与其他序列交界处的25bp不完全直接重复 (imperfect direct repeat)，右