猪丁型冠状病毒荧光定量RT-PCR与S1蛋白间接.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 王经纬 等/猪丁型冠状病毒荧光定量RT-PCR 与S1 蛋白间接ELISA 检测方法的建立及应用 1265 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn August 25, 2017, 33(8): 1265−1275 DOI: 10.13345/j.cjb.170119 ©2017 Chin J Biotech, All rights reserved ·新方法· RT-PCR S1 ELISA 1 1 1 1 1 1 1 1 2 王经纬 ，雷喜梅 ，覃盼 ，赵鹏伟 ，王斌 ，王逸雯 ，李懿婷 ，金颢蕊 ，李龙 ， 黄耀伟1 1 310058 2 310004 , , , . RT-PCR S1 ELISA . , 2017, 33(8): 1265−1275. Wang JW, Lei XM, Qin P, et al. Development and application of real-time RT-PCR and S1 protein-based indirect ELISA for porcine deltacoronavirus. Chin J Biotech, 2017, 33(8): 1265−1275. 摘 要: 最近，新发现的猪丁型冠状病毒 (Porcine deltacoronavirus ，PDCoV) 可导致仔猪腹泻，亟待建立有效 准确的核酸及血清学检测方法并调查猪场的 PDCoV 感染情况。本研究采用针对病毒 M 基因的探针荧光定量 RT-PCR 检测方法，对2014−2015 年间收集的河南、湖南、浙江、江西、安徽、河北、黑龙江、江苏、山东和 上海等 10 个省市收集的共254 份腹泻仔猪小肠匀浆或粪便样本进行检测，共检出 11 份PDCoV 阳性样本，总 阳性率为4.33% 。采用在昆虫细胞表达纯化的PDCoV 囊膜 S1 蛋白为包被抗原，建立间接酶联免疫吸附试验 (ELISA) 方法，检测 2015−2016 年间收集的来自江苏、湖南、浙江等 7 个省份的 609 份具有腹泻症状的猪血 清样品，抗PDCoV S1 抗体检出率为44.17% (269/609) 。上述建立的两种方法分别针对病毒的RNA 或抗体对 PDCoV 进行特异性检测，可以应用于PDCoV 流行情况的监控。 : 猪丁型冠状病毒，实时荧光定量 RT-PCR ，间接ELISA ，S1 基因 Received: March 25, 2017; Accepted: June 9, 2017 Supported by: National Key Research and Development Program of China (No. 2016YFD0500102). Corresponding author: Yao-Wei Huang. Tel: +86-571 E-mail: yhuang@ (No. 2016YFD0500102) 1266 ISSN 1000-3061 CN 11-1998/Q Chin J Biotech August 25, 2017 Vol.33 No.8 Development and application of real-time RT-PCR and S1 protein-based indirect ELISA for porcine deltacoronavirus 1 1 1 1 1 1 1 Jingwei Wang , Ximei Lei , Pan Qin , Pe