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第十二章 基因信息的传递 第一节 DNA的生物合成* 第二节 RNA的转录* 第三节 翻译—蛋白质的生物合成*; 1、DNA半保留复制;15N标记的E.coli. DNA密度梯度离心试验 Meselson和Stahl， 1958年; 2、半不连续复制 DNA聚合酶催化的方向是5，→3，。 前导链： 滞后链： 1968年，发现冈崎片段 ;（二）参与DNA复制的有关物质 1、 DNA聚合酶 （1）聚合作用 （2）3‘→ 5’外切酶活性 （3） 5’ → 3‘外切酶活性 ; 2、 解螺旋酶 大肠杆菌的解螺旋酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ与rep蛋白共同作用，将DNA两条链解开。 解螺旋酶I、II、III沿着模板链的5’→3’方向随着复制叉的前进而移动，而rep蛋白则在另一条模板链上沿3’→5’方向移动。 3、 单链DNA结合蛋白（SSB） 复制叉上的解螺旋酶，沿双链DNA前进，产生单链区，大量的单链DNA结合蛋白与单链区结合，阻止复性和保护单链DNA不被核酸酶降解。 ; 4、 拓扑异构酶（或称旋转酶） 属DNA拓扑异构酶Ⅱ，可引入负超螺旋，消除复制叉前进时带来的扭曲张力。 拓扑异构酶分两类：I和II，广泛存在于原核生物和真核生物。 (1) 拓扑异构酶I 使DNA的一条链发生断裂和再连接，反应无须供给能量，主要集中在活性转录区，与转录有关。 (2)拓扑异构酶Ⅱ 使DNA的两条链同时断裂和再连接，当它引入超螺旋时需要由ATP供给能量。分布在染色质骨架蛋白和核基质部，与复制有关。 ; 5、 DNA连接酶 连接双链DNA上的切口。 大肠杆菌连接酶只能在模板上连接DNA缺口。T4DNA连接酶即可连接粘性末端的DNA，又可连接平齐末端的双链DNA。 E.coli.和其它细菌的DNA连接酶以NAD为能源，动物细胞和噬菌体DNA连接酶以ATP为能源。; 6、 RNA引物和引发酶 细胞内，DNA的复制需要引物（DNA或RNA），引物酶或RNA聚合酶可合成6-10个碱基的RNA引物。 DNA复制为什么要用RNA引物？（为什么DNA聚合酶要用引物，RNA聚合酶不需要引物？） ⑴从模板复制最初几个核酸时，碱基堆集力和氢键都较弱，易发生错配 ⑵新复制的最初几个核苷酸，没有与模板形成稳定双链，DNA聚合酶的5，→3，校对功能难发挥作用。 ;（三）DNA复制过程; 1、起始 （1）复制的起始点和方向 复制起点是以一条链为模板起始DNA合成的一段序列。有时，两条链的复制起点并不在同一点上（不对称复制，如D环复制）。 多数生物的复制起点，都是DNA呼吸作用强烈的区段，即经常开放的区段，富含A.T，而且可能含有大量的反向重复和保守序列。;环状DNA复制起点; （2）DNA复制的起始 引发：当DNA的双螺旋解开后，合成RNA引物的过程。 引发体：引物合成酶与各种蛋白质因子（dnaB、dnaC、n、n＇n＇＇I）构成的复合体，负责RNA引物的合成。 引发体沿着模板链5’→3’方向移动（与冈崎片段合成的方向正好相反，而与复制叉移动的方向相同），移到一定位置上即可引发RNA引物的合成。 ? E.coli.DNA复制原点ori C，由245bp组成，三组13bp重复序列（近5’端处），四组9 bp重复序列（另一端处）。 ; 2、复制的延长 前导链只需要一个RNA引物，后随链的每一个冈崎片段都需要一个RNA引物，链的延长反应由DNA pol.Ⅲ催化。 复制体：在DNA合成的生长点（既复制叉上）分布着许多与复制有关的酶和辅助因子，它们在DNA的模板链形成离散的复合物，彼此配合进行高度精确的复制，称为复制体。 复制体沿着复制叉方向前进就合成DNA。;3、复制的终止 RNA引物的切除及缺口补齐： DNA polⅠ的5， → 3，外切活力，切除RNA引物。 DNApolⅠ的5， → 3，合成活性补齐缺口。 DNA切口的连接： DNA ligase，动物、真核由ATP供能，原核由NAD供能。 DNA合成的终止： 环状DNA、线性DNA，复制叉相遇即终止。 ?;（四）真核生物DNA复制的特殊规律 1、 复制起点和单位 真核生物染色体DNA是多复制子，有多个复制起点，可以多点起始，分段进行复制。每个复制子大多在100-2