新型卤酚化合物3’,4’-二羟基-3-氯二苯甲酮对大鼠缺血-再灌注心肌保护作用.docVIP

新型卤酚化合物3,4’-二羟基-3-氯二苯甲酮对大鼠缺血/再灌注心肌保护作用摘要：目的 明确新型卤酚化合物3,4’二羟基3氯二苯甲酮（LM46）对缺血/再灌注损伤后大鼠心肌的保护作用。方法 利用大鼠心脏局部缺血/再灌注模型，检测LM46处理后大鼠心肌梗死面积和血清酶学指标的变化。结果 在再灌注早期静脉给予LM46能有效减轻心肌缺血/再灌注损伤。表现为梗死面积减小，超氧化物歧化酶(SOD)活力升高，显著降低血清乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、丙二醛（MDA）水平。结论 在5 mg/kg～15 mg/kg剂量范围内，LM46有显著的心肌保护作用。 关键词：3,4’二羟基3氯二苯甲酮；缺血/再灌注；心肌保护；大鼠 中图分类号：R542.2 R285.5 文献标识码：A 文章编号2012 心肌缺血/再灌注损伤（MIRI）时迅速产生的活性氧类物质会使血管内皮细胞的完整性遭到破坏，造成通透性增加，而导致水肿的发生，同时细胞核DNA被自由基攻击造成氧化伤害，这是MIRI病理过程的重要触发因素［13］。从海藻中提取得到的多种卤酚化合物均表现出很好的抗氧化活性。本课题组以天然来源的卤酚化合物为先导化合物，进行了结构优化和修饰，合成了系列卤酚衍生物，体外活性筛选结果显示，全新结构化合物3,4’二羟基3氯二苯甲酮（LM46）对过氧化氢损伤的人脐静脉内皮细胞具保护活性［4，5］。本实验利用在体大鼠MIRI研究LM46可能具有的药物后处理心肌保护作用。 1 材料与方法 1.1 材料 雄性健康SD大鼠，体重230 g～260 g，由山西医科大学实验动物中心。HX200动物呼吸机（成都泰盟科技有限公司）；RM6240B生物信号采集处理系统，YPJO1型压力换能器（成都医疗仪器厂）。 LM46注射液由本课题组提供，Evens blue染液购自Sigma公司；2,3,5氯化三苯基四氮唑（TTC)染液购自AMRESCO公司；丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）检测试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。 1.2 方法 将实验动物随机分为6组，每组8只。即假手术组、模型组、溶剂对照组及LM46低、中、高剂量组（5 mg/kg、10 mg/kg、15 mg/kg）。大鼠MIRI建立参照文献［6，7］，记录正常Ⅱ导联心电图（ECG）。在动脉圆锥与左心耳之间冠状动脉左前降支（LAD）处穿线，除假手术组外，其余各组在LAD下拉紧结扎线使硅胶管压迫LAD 造成血流阻断（以ECGⅡ导联ST 段抬高0.1 mV或T波高耸，心肌颜色变为暗红色，作为LAD 结扎成功的标志）。LAD供血区域左心室左前壁缺血40 min 后，松开结扎线，恢复血液LAD 再灌流。假手术组只穿过不结扎。再灌注过程开始1 min内，模型组和假手术组静脉注射生理盐水1 mL/kg，溶剂组静脉注射空白溶剂1 mL/kg作为对照，LM46分别经股静脉推注相应组别实验用药物，再灌注3 h。 1.3 指标检测 测定各组大鼠心脏梗死面积［8］。血清酶学指标检测，TAB法测得血清中MDA含量。LDH、CK活力测定均按照试剂盒说明书规范操作［9］。 1.4 统计学处理 计量资料以均数±标准差（x±s）表示。应用SPSS15.0软件组间单因素方差分析。 2 结 果 2.1 不同计量LM46对缺血/再灌注心肌梗死面积的影响（见表1） 危险区面积占左心室面积的百分比（AAR/LV）在各组间无统计学意义，表明在造模过程中，结扎LAD的手法稳定，各组模型的缺血程度大体相当。LM46不同剂量组心肌梗死面积占危险区面积的百分比（AN/AAR），显著小于模型组和溶剂对照组，且呈现明确的量效关系。 2.2 大鼠血清SOD活力及MDA含量的测定（见表2） 各不同给药组血清中SOD活力显著高于模型组和溶剂对照组，MDA含量显著低于模型组和溶剂对照组，且呈现明确的量效关系。 2.3 大鼠血清LDH、CK活力测定(见表3) 给药组血清中CK、LDH活力显著低于模型组和溶剂对照组，且呈现明确的量效关系。 3 讨 论 本研究结果显示，与模型组相比，在5 mg/kg～15 mg/kg剂量范围内，不同剂量LM46对大鼠MIRI具有明显的保护作用。 脂质过氧化作用及能量代谢异常是导致MIRI的重要因素。心肌缺血时，由于心肌内源性氧自由基清除剂减少。再灌注以后，分子氧再次进入心肌组织中，氧自由基水平继续上升。自由基会使血管内皮细胞的完整性遭破坏，造成通透性增加，而导致水肿的发生，同时细胞核中的DNA会被自由基攻击造成氧化伤害，甚至细胞死亡［10,11］。 心肌缺血再灌注损伤后SOD活力下降，氧自由基增多，导