实验一 叶绿体色素分离和理化性质测定.pptVIP

实验材料: 菠菜叶片;叶绿体中含有绿色素(包括叶绿素a和叶绿素b，酯类化合物)和黄色素【包括胡萝卜素(烃类)叶黄素(衍生的醇类)】两大类。它们与类囊体膜上的蛋白质相结合，而成为色素蛋白复合体，不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇或丙酮等有机溶剂提取。;乙醇提取叶绿体色素： 1)取菠菜叶片洗净、擦干、剪碎、混匀，称2g左右，放入研钵中。 2)加入少量石英砂及碳酸钙粉，加1～2滴管95%乙醇，研磨至糊状; 再加10～15ml 95%乙醇，提取1～3min，过滤于三角瓶中(滤纸用乙醇润湿） 3)残渣用5ml 95%乙醇冲洗，一同过滤于三角瓶中。 ;水 提 取 液 暗 光;因吸附剂对不同物质的吸附力不同，当用适当的溶剂推动时，混合物中各成分在两相(流动相和固定相)间具有不同的分配系数，所以它们的移动速度不同，经过一定时间层析后，便将混合色素分离。; 1)圆形定性滤纸1张,用细头的吸管在其中心戳一圆形小孔; 2)取一张窄滤纸条,沿纸条长度方向涂色素，限制在0.5cm，垂直风干，重复涂抹10次。 涂抹色素要适量，量多拖尾，量少色带看不清。 技巧方法：将浓色素滴到玻璃皿盖上，涂抹纸片 3)沿长度方向卷成纸捻; 4)纸捻带有色素的一端插入圆形滤纸的小孔中， 色素一端与滤纸平齐(勿凸出)。;4)康维皿放置培养皿内，中央室中加4/5以上的推动剂。 5)把带有纸捻的圆形滤纸平放在康维皿上，使纸捻下端浸入 推动剂中。盖好培养皿(为什么)。 6)推动剂到达滤纸边缘1/2时，取出滤纸，风干。 7)剪下一部分滤纸，附到实验报告中。;注意事项： 1、色素多涂抹几次，风干后再涂抹第二次。 细，匀，直，浓。 2、涂抹的色素要适量，量多易拖尾，量少色带弱 3、纸捻卷紧； 4、色素涂抹的宽度不要超过纸条的二分之一； 5、中心孔小又圆；平齐，勿突出； 6、分离时一定要盖严培养皿盖，防止推动剂蒸发。 7、实验结束后，推动剂倒入到专用回收桶中。;从外往内分别是橙黄色、黄色、蓝绿色和黄绿色。;取一支20ml的刻度试管，加入5ml浓的叶绿素乙醇提取液，观察透射光和反射光的颜色。 ;4、皂化作用（绿色素与黄色素的分离）;操作步骤： 1、叶绿素荧光观察所有试管中，加入1.5ml 20%KOH-甲醇溶液，充分摇匀； 2、加入5ml苯，摇匀 ； 3、沿管壁加入适量蒸馏水1-1.5ml，只需轻微摇动。 ;5、吸收光谱的观察;叶绿素中的Mg2+被H+所取代而成褐色的去镁叶绿素 铜取代H+形成绿色铜代叶绿素，相对稳定，在光下不易破坏，故常用此法制作绿色多汁植物的浸渍标本;1.填写记载表、分析、讨论、注意事项 2.实验报告：下周三之前交到B-129房间 3.下次实验：叶绿体色素的定量测定 B-120