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2017-08-19 发布于河南
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实验十一、Feulgen和PAS反应.ppt

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实验十一、Feulgen和PAS反应

实验十一;实验目的与要求;一、实验的基本原理; Feulgen反应的基本原理：稀HCl水解DNA，破坏嘌呤和脱氧核糖间的配糖键，并在脱氧核糖C1端形成游离的醛基，醛基和Schiff试剂结合，形成紫红色的化合物。因此在有DNA的部位，就会呈现除紫红色阳性反应。;PAS反应的基本原理：利用强氧化剂使多糖产生游离的醛基，醛基和Schiff试剂结合，形成紫红色的化合物。因此在有多糖的部位，就会呈现除紫红色阳性反应。;;核酸的显示——Feulgen反应取鸭血，血涂片，室温凉干，甲醇室温固定5 min，凉干; 蒸馏水过一下； 1 mol/L 盐酸(600C )水解8-10 min; 1 mol/L 盐酸（室温）1 min; 蒸馏水稍洗；置Schiff试剂中室温染色1小时左右；亚硫酸盐溶液洗3次，总时间为6 min; 自来水流水冲洗5 min，蒸馏水过一下；用1%亮绿水溶液复染5-10秒；自来水流水冲洗2 min; 蒸馏水稍洗；甘油/PBS封片剂封片；显微??观察。;糖类的显示——PAS反应取鸭血，血涂片，室温凉干，甲醇室温固定5 min，凉干; 蒸馏水过一下； 1%过碘酸水溶液浸泡2-5min; 蒸馏水洗； Schiff试剂浸泡15min; 亚硫酸盐溶液浸泡3次，共6min; 自来水冲洗5min; 蒸馏水浸泡1min; 苏木精复染细胞核10-15min; 自来水流水冲洗2min; 蒸馏水稍洗；甘油/PBS封片剂封片；显微镜观察。;使用Schiff试剂时要注意不小心染色; 盐酸水解时要注意温度及处理时间. ;五、作业与思考题简述Feulgen反应和PAS反应的原理，并描述显微观察到的实验现象。