实验三血红蛋白(Hb)和全血尿素氮.docVIP

实验三 血红蛋白（Hb）及全血尿素氮的测定 一、血红蛋白的测定（氰化高铁血红蛋白法） 血红蛋白（Hb）是一种结合色蛋白，色素部分是亚铁血红素，蛋白质部分是珠蛋白。1分子的Hb是由4分子的亚铁血红素和1分子的珠蛋白结合而成的。 Hb的主要生理功能是：1、运输氧气（O2）和二氧化碳（CO2），2、缓冲作用。每分子的Hb可结合4分子的氧气，在标准的情况下（0℃，1个大气压），每克Hb能结合1.39毫升氧气。HbO2比Hb具有较强的酸性，例如，在红细胞中，1毫摩尔的HbO2能产生1.88毫克当量的氢离子（H+），而1毫摩尔的Hb只能产生1.28毫克当量的H+。因此，在组织中，每放出1毫摩尔O2（体积22.4毫升），就能多结合0.60毫克当量的。因而Hb在调解体内酸碱平衡也有一定的作用。所以，在运动训练和比赛中，Hb不仅能为组织提供氧气，促进物质的有氧代谢和带走CO2，而且也能起中和酸性的作用。 调查研究认为：正常人与运动员Hb含量没有明显差异。故Hb的正常值男性为120-160克/升；女性110-150克/升。贫血仍采用临床标准，即成年男性低于120克/升；成年女性低于105克/升；14岁以下的少年、儿童，不论男女，均以低于120克/升作为贫血标准。 Hb在运动训练的不同阶段，其含量不完全相同，这与运动员的机能状态、训练水平及遗传因素等关系密切。因此，系统测试Hb的含量，对于评定运动员的机能状态和运动员选材等具有重要的意义。 （一）实验目的 1、学习血红蛋白的生物学功能及在运动训练中的作用 2、学习超微量血红蛋白的测定方法及原理，熟练掌握试管、相关仪器的操作技能 （二）实验原理 Hb被高铁氰化钾[K3Fe(CN)6]氧化成高铁血红蛋白（Hi），Hi与氰离子（CN-）结合成氰化高铁血红蛋白（HiCN），它在540nm有一吸收峰，测定其光密度，与标准血红蛋白进行比较，而得到Hb的含量。 （三）实验试剂和仪器 1、试剂： （1）HiCN稀释液：称取高铁氰化钾[K3Fe(CN)6]200毫克，氰化钾（KCN）50毫克，磷酸二氢钾（KH2PO4）140毫克，加蒸馏水稀释至1升。此试剂应呈透明、淡黄色，PH在7.0-7.4之间，如不到此范围，可用NaOH调整。以蒸馏水作为空白，在540nm比色，读数也是零。此液应置于棕色试剂瓶中，放在室内阴暗处或冰箱4。C以上，可保存数月，注意不能冷冻。 （2）75%的酒精 2、仪器： 分光光度计、一次性采血针、一次性采血管（20微升）、消毒棉球、10毫升试管 （三）实验操作 测定管（带塞刻度试管） 氰化高铁血红蛋白稀释液5ml a1 酒精消毒手指，并采取新鲜血液0.02ml 混匀后放置3-5分钟 540nm比色,空白调零读取测定管光刻度值(OD测) （四）计算： Hb含量（克/升）= F值?测定管光密度值 F值=标准管血红蛋白含量（克/升）/标准管光密度=36.8 （五）注意事项 1、高铁氰化钾法测定血红蛋白比较准确、稳定，是目前国际承认的标准，但试剂中有氰化钾，剧毒，在试验进行过程中避免污染，试验完毕注意药品的处理，不能乱倒。 2、取血部位和取血时间对血红蛋白的影响较大，但最好固定在早晨起床前取样，固定在一个部位（如手指）。同时，取血时注意擦干手，消毒，用挤出的第二滴血。 二、超微量全血血尿素氮的测定（二乙酰一肟法） 尿素是体内蛋白质、氨基酸分解代谢的终产物。在生命活动中，蛋白质是不断进行代谢，蛋白质水解生成氨基酸，氨基酸经脱氨基作用所生成的氨，对于人体来说，是一种有毒物质，在它排出体外之前，必须经过肝脏的鸟暗算循环转化为尿素（无毒物质）才能排出体外。 研究证明，血尿素的含量与运动量及集体的恢复状况有关，也与肝功能、训练水平、身体机能的适应程度和蛋白质代谢有关。因此，测定血尿素的意义在于协助教练员了解运动量是否适宜、运动员训练水平的高低、机能的适应性程度和体内在特定条件下的蛋白质代谢水平。 （一）实验目的 1、学习尿素的生成原理及意义 2、学习超微量全血尿素氮的测定方法及原理，熟练掌握试管、相关仪器的操作技能 （二）实验原理 血液中的尿素在强酸的条件下与二乙酰一肟共热反应，生成红色复合物（即Fearon氏反应）。和经同样处理的标准液比色，即可求出血液中尿素氮的含量。 H+(混酸) H+(混酸) 二乙酰一肟+H2O 二乙酰+羟胺 H+ H+ 二乙酰+尿素 二嗪衍生物（红色） （三）实验试剂及仪器 1、实验试剂 （1）10%三氯醋酸 （2）二乙酰一肟液（二乙酰一肟——氨基硫脲，代号DAM-TSC）:称取二乙酰一肟600mg，硫氨脲30mg，加蒸馏水溶解至即成100ml。存入棕色瓶中，此液久置冰箱有结晶析出，影响显色，最好使用期不