常用液相色谱-柱使用和保养.pptVIP

常用液相色谱柱使用与保养SOP;主要内容 1、液相色谱柱基本理论知识 2、常用液相色谱柱使用方法与维护保养 3、液相色谱柱常见问题分析与解决方案 4、结语;1、常用液相色谱柱基本理论知识;1.2 液相色谱柱的结构及其主要功能 液相色谱柱由柱管、压帽、卡套（密封环）、筛板（滤片）、接头、螺丝（封头）与柱填料等组成。 柱管：多用不锈钢制成，若果使用时柱压不高于70 kg/cm2时，也可采用厚壁玻璃或石英管，管内壁要求有很高的光洁度。用于柱填料的装填。 压帽：即色谱柱两端套合于柱管端外壁的塑性圆柱帽，中部有小孔，多为聚四氟乙烯制成，用于固定筛板。 密封环：位于接头螺旋环内壁的弹性环，多为聚四氟乙烯制成，用于色谱柱两端压帽与柱外壁的密封。 ;筛板：位于色谱柱两端紧贴柱管端的筛网状薄片，由烧结不锈钢或钛合金制成，孔径取决于填料粒度，一般为0.2~20um(5~10um)。用于防止填料从柱管内漏出。 接头：柱两端连接流动相与柱管的中空环套，由不锈钢制成。用于柱管路联通与柱端高压固定。 封头：柱两端的密封螺丝，用于保存色谱柱时封头。 柱填料：装填于柱管内的固定相担体，其直接决定了色谱柱的类型与用途，是色谱柱的核心。多为无定形或球形硅胶基质，也有环糊精、活性炭、聚苯乙烯-二乙烯基苯、聚甲基丙酸酯、氧化铝等基质。用于色谱分离。 ;1.3 液相色谱柱的分类与应用范围 分类方法很多，可按键合相类型、用途（分析型与制备型）、基质种类等进行分类。 1.3.1硅胶基质柱（4大类） 目前，分析型液相色谱柱多为硅胶基质柱，细分为： 高纯硅胶柱：以高纯度硅烷化硅胶（Silica）为填料，应用范围较广，但只能在PH2.0-7.5，小于60度的条件下使用。又由于强极性硅羟基（Si-OH)的次级保留效应较强，所以应用受到局限，已被键合相柱所取代。 反相硅胶柱：是以硅烷化硅胶为基质，表面键合弱极性官能团的固定相。目前多用C18（ODS）、C8（MOS）、C4（B）、C6H5（phenyl，苯基）等。用于分离大多数有机化合物，应用范围最广。 ;正相硅胶柱：是以硅烷化硅胶为基质，表面键合极性官能 团的固定相。目前较多的为：NH2—（氨基）、CN—（氰基）、DIOL（二羟基，也常做HILIC单独分类列出，多用于分离有机酸、蛋白质等）。多用于分离光学异构体和反相柱子不能分离的极性比较大的物质 。 离子交换柱：是以硅烷化硅胶为基质，以磺化交联键合强阳/阴离子基团（磺酸盐/季铵碱）的固定相，又分为强酸性、强碱性、弱酸性、弱碱性等不同规格。用于分离解离性较强的有机盐类化合物。（注意：不要同离子色谱混淆，离子色谱主要是分离无机盐类化合物或某些带点离子。）; 1.3.2聚合物基质柱 聚合物基质柱是指采用聚苯乙烯—二乙烯基苯、聚甲基丙烯酸脂、多孔性微球蛋白等聚合物凝胶作为主要填料的一类色谱柱。其相对于硅胶柱具有更强的疏水性及更宽泛的pH范围（1.0～14.0），但柱效较低，目前主要应用于凝胶渗透色谱（GPC）、凝胶过滤色谱（GFC）及分子排阻色谱（MEC）。主要用于分离蛋白质类等大分子化合物。 1.3.3其他无机物填料柱 这类色谱柱仅限于特殊用途，主要有石墨化碳、氧化铝（Al2O3）、氧化锆（ZrO2）等填料。不需要进行表面改性，其自身表面即可对各类化合物有强保留。可在任意pH（氧化铝除外，不能大于12.0）及高温度（可达100℃）下使用。其中， ;;1.3.5常用液相色谱柱主要应用范围与特点汇总 1.3.5.1反相色谱柱 ;1.3.5.2正相色谱柱;1.3.5.3聚合物基质柱（eg.聚苯乙烯柱） 单独的聚苯乙烯类填料柱主要用于分离蛋白质类等大分子化合物，多用于GPC、GFC、MEC等；若与离子交换基团共键则形成离子交换柱，用于分离酸性化合物（磺酸基团）、碱性合物（季铵基团）及药物代谢产物等。特点：在1＜PH＜13的流动相中稳定；分离峰形较好，柱子寿命较长。 1.3.5.4其他无机物填料柱 如氧化铝、石墨化碳、氧化锆、硅藻土等，主要作制备色谱用。 ;1.4液相色谱柱制备工艺简述 不同品牌色谱柱制备工艺各异，但都可归纳为如下流程（以硅胶柱为例）： 硅烷化硅胶制备（四乙氧基硅烷脱乙基与聚合）→Si-OH 基暴露（ 脱乙基，置换成H）→海绵状多孔硅胶构造（物理匀质过程）→官能团键合（各种官能团与Si-OH 键合）→端基封口（对残余的Si-OH 用小分子的氯-甲基、氯-乙基键合 ）→润湿混合（加乙醇等调匀，其配方各厂家均有专利保护）→装填（机械装填或手工装填，层层装填，压紧，润湿）→高压平衡（轴向加压或径向加压，各厂家均有专利保护）→干燥（此步为关键工艺步骤，各厂家均