人淀粉样蛋白前体695基因及人烟碱乙酰胆碱受体α4β2亚单位基因共表达细胞模型的构建.pdfVIP

中国药理学与毒理学杂志 2008年2月； 22(1)：73—76 Chin J Pharnu~ol Toxicol 2008 Feb； 22(1)：73—76 ·73· 人淀粉样蛋白前体695基因及人烟碱乙酰胆碱受体 014 亚单位基因共表达细胞模型的构建 聂惠贞，李佐青，沈颖华，黄旭，王 鑫，韩燕飞，殷 明 (上海交通大学药学院，上海 200240) 摘要：目的 为满足寻找可能影响淀粉样B蛋白 是经0【分泌酶作用，产生分泌型的APP(sAPP)，具 (A13)在阿尔茨海默病过程中的药物实验的需求， 有神经营养、促神经细胞发育等神经细胞保护作用。 建立共表达人淀粉样蛋白前体(APP)695基因和烟 另外一条水解途径是经过B和^y分泌酶水解剪切 碱乙酰胆碱受体(nAChR)cx4132亚单位基因的细胞 形成淀粉样B蛋白(amyloid B．protein，AB)¨]。阿 模型。方法 用脂质体转染方法把APP 695基因转 尔茨海默病(Alzheimer S disease，AD)的AB学说认 染进已稳定转染 nAChR cx4132亚单位基因的 为，病理状态下脑内A13片段A13。一加及A13。 产生 SH—EP1细胞。用500 mg·L G418加压筛选，并挑 增加形成寡聚体，进而形成斑块，对神经元产生多方 选细胞单克隆。用RT．PCR和Westem蛋白印迹法 面的毒性作用，表现为AD的一系列症状 j。 对转染后的细胞单克隆进行鉴定，挑取成功转染并 神经元烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcho． 高表达APP 695的细胞进行克隆。膜片钳检测所挑 1ine receptor，nAChR)为配体门控性离子通道受体， 细胞克隆的cx4132受体功能。结果 挑出成功稳定 在肌肉和神经系统广泛表达多种亚型，在中枢神经系 转染人APP 695基因及人nAChR cx4132亚单位基因 统以,~4132亚型表达最为广泛 j。近年来关于神经 的共表达细胞克隆株。膜片钳方法检测到此细胞克 元nAChR和AD的研究提示，激动中枢nAChR可以 隆株上nAChR cx4132存在活性。结论 成功制备了 减少A13产生，增强认知和学习记忆功能，减缓AD的 共表达人APP 695基因及人nAChR cx4132亚单位基 发生发展 。神经元nAChR被认为是AD治疗药 因的细胞模型，为探讨神经元nAChR cx4132亚型对 物的新靶点j，但最为相关的受体亚型还不清楚。为 A13加工影响的药物实验提供了条件。 了比较和寻找有效影响该受体亚型，进而可能成为 关键词：淀粉样B蛋白前体；受体，烟碱 AD防治药物的化合物，本研究制备了人APP 695基 因和人nAChR cx4132亚型基因在SH—EP1细胞的稳定 中图分类号：R965．2 共表达模型，为进一步在细胞水平观察cx4132亚型对 文献标识码：A APP和A13水平的影响打下基础。 文章编号：1000-3002(2008)01-0073-04 1 材料与方法 淀粉样蛋白前体(amyloid protein precursor， APP)基因定位于2l号染色体长臂中段，APP基因 1．1 质粒、菌株和细胞株、工具酶和主要试剂 转录后可加工剪接成为多种同源体，主要以3种形 穿梭质粒pcDNA3．1(一)为Invitrogen公司产