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生物样品中氨基糖苷类药物的免疫分析法综述 药学0902 陈明静 摘要 综述了氨基糖苷类抗生素的免疫分析方法，主要有：酶免疫分析法、放射免疫分析法、荧光偏振免疫法、淬灭荧光免疫法、化学免疫法、胶乳凝集抑制速率比浊法等。 关键词 氨基糖苷类抗生素；免疫分析；治疗药物监测 正文 0 前言 氨基糖苷类抗生素是一类应用广泛，需进行治疗药物监测（TDM）的广谱抗菌药物，主要包括庆大霉素（GM）、链霉素（SM）、卡那霉素（KM）、巴龙霉素（PM）、新霉素（NM）等。该类药物口服难吸收，对于全身感染需注射、药，肌注射后30~90min达血浓峰值。当血浆浓度超过20~30μmol/L时可引起耳中毒和肾损伤。 免疫分析法（Immunoassay，IA）是指以特异性抗原-抗体反应为基础的分析方法，其实质都是抗原-抗体竞争结合反应，即竞争抑制原理。IA按标记物的种类可分为放射免疫分析法（radioimmunoassay，RIA）、酶免疫分析法（enzyme immunoassay，EIA）、荧光免疫分析法（fluorescence immunoassay，FIA）、化学发光酶免疫分析法（chemiluminescent enzyme immunoassay，CLEIA）。本文主要对近年来各种免疫分析方法在氨基糖苷类药物分析中的应用和已获得的进展进行评述。 1 放射免疫分析法 放射免疫分析法（RIA）是利用放射性同位素的测量方法与免疫反应基本原理相结合的一种同位素分析技术。虽然该方法具有灵敏度高、特异性强、样品用量少、标记物容易制备以及放射性强度容易检测等优点，但会造成放射性污染，后处理困难，且需要同位素示踪室和计数仪器，费用较高，所以目前已很少应用。 2 酶免疫分析法 酶免疫分析法（EIA）由于存在交叉免疫反应，同时标记酶本身不能直接产生信号，需有其它试剂（如底物、辅酶等）的参与才能完成酶反应，从而引起光谱等的变化以供测试。其准确度和精密度不高，属于半定量分析法，主要用于TDM、用药过量和中毒急救时的检测。 2.1 均相EIA 均相酶免疫法是EIA的一种，具有操作简便、快速的特点。SyVa公司的酶放大免疫检测技术（EMIT）可用于测氨基糖苷类的体内浓度，其测定值非常接近靶位浓度，适用于临床应用。 Anders[3]等曾就血清中妥布霉素（TM）用EMIT和MA同时比较测定，结果显示，当与某些半合成青霉素类药物在不同温度下共存一定时间后，EMIA测定结果较MA高，其原因是在存放过程中由于共存药物而失活的TM仍被EMIA检测。 2.2 非均相EIA 非均相EIA需先进行游离的和结合的标记物的分离，以固相法最常用。固相酶免疫测定方法在1971年最初建立时被称为酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay），简称ELISA。 Haasnoot[4]等用ELISA法对牛奶和动物脏器组织中SM、GM和NM等AGs的残留量进行检测，结果显示，GM ELISA除SisM存在25%免疫活性外，其余AGs的免疫活性均小于0.01%；SM ELISA双氢SM有150%免疫活性，其余均无免疫活性。 3 荧光免疫分析法 荧光免疫分析法（FIA）灵敏度高，不存在RIA的放射性污染和辐射伤害，且易实现自动化分析，因此成为目前TDM实验室最为常用的IA。FIA根据产生荧光方式的不同，可分为底物标记荧光免疫分析法（SLIFA）、荧光偏振免疫分析法（FPIA）、荧光淬灭免疫分析法（QFIA）和荧光增强免疫分析法（FEIA），其FPIA和QFIA常用于AGs的测定。 3.1荧光偏振免疫分析法（FPIA） FPIA是20世纪70年代根据偏振原理建立起来的一种免疫分析方法。抗原用荧光标记，激发光经偏振板后产生的偏振激发光照射到免疫反应装置上可产生偏振荧光。标记抗原运动散乱，而形成的标记抗原-抗体复合物运动有序。因此，偏振光的强度与为标记的抗原量成比例。FPIA兼具荧光分析的灵敏度和均相免疫法专一快速的特点，测定结果重现性好，试剂稳定，操作方便。随着美国雅培（Abbot）公司生产了TDx试剂盒，FPIA被广泛应用。 Forest[5]等曾分析比较FPIA和HPLC法测定生物基质中的NTM，发现二者具有良好的相关性（r =0.88~0.93）。Pyder.D[6]等将血样稀释5倍后用TDx测SM含量，检测限8.6μmol/L,结果准确。White[7]用FPIA测定血清中GM，检测灵敏度为0.2mg/L，在此浓度的测定偏差小于1%（RSD为1.8%）。 3.2荧光淬灭免疫分析法（QFIA） QFIA的原理一般认为是：当一定量的荧光素标记药物与其特异抗体结合后，荧光发生部分淬灭。