寒冷地区硫酸软骨素生产工艺改良.docVIP

寒冷地区硫酸软骨素生产工艺改良摘要：目的分析寒冷地区硫酸软骨素产率及产品品质低下的原因，改良生产工艺以提高产率和产品质量。方法 以猪、牛、羊气管软骨为原料，用碱解和酶解相结合的方法提取硫酸软骨素。综合考虑寒冷地区各种特殊因素，增加碱洗脱脂。设计了浓度梯度实验，得出最佳工艺条件。结果产量可达10.5%，比原工艺提高3%~3.5%，纯度达90%以上。结论分析出寒冷地区硫酸软骨素产率及产品品质低下的主要原因，改良的工艺使产品产率及质量都有明显提高。 关键词：寒冷地区；硫酸软骨素；生产工艺 中图分类号：R282.74文献标识码：A文章编号：1672-979X(2007)08-0028-04 硫酸软骨素（chondroitin sulfate，CS）由N-乙酰-D-氨基半乳糖硫酸酯与D-葡糖醛酸多聚体组成。链中的五碳糖通过β-1,4与β-2,3交替结合成多聚体。CS主要有CS A、CS B、CS C 3种，而CS B因结构中的糖醛酸为艾杜糖醛酸。目前改称为硫酸皮肤素。天然产物中CS主要存在形式为CS A和CS C。CS A型的硫酸基在N-乙酰-D-氨基半乳糖硫酸酯的4位碳上，CS C型的硫酸根在N-乙酰-D-氨基半乳糖硫酸酯6位碳上[1]。 CS为灰白色粉末，是从猪、牛、马、羊、鸡等动物的鼻骨、喉骨、软肋、气管、月牙骨以及其他部位的软骨中提取的酸性黏多糖，作为药物的商品名曾称为“康得灵”，主要用于治疗冠状动脉粥样硬化性疾病、胆固醇增高、心绞痛、心肌缺血，还可用于某些神经性头痛、神经痛、关节痛、偏头痛，链霉素引起的听觉障碍以及肝炎的辅助治疗。新的研究表明，CS还有促进钙吸收和防止钙流失的功效。此外，还加入化妆品中用于皮肤保健[2]。 1材料和方法 1.1原料及试剂 猪气管软骨（干品）。盐酸、氢氧化钠、95%乙醇、碱性蛋白酶、胰蛋白酶均为化学纯。 1.2仪器 UV-754紫外分光光度计（上海第三分析仪器厂）；PHSJ-3F pH计（上海精密科学仪器公司）；RT-100搅拌式夹层锅（诸城市日通机械有限公司）；DHG-9123A鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；TN-B-2500托盘扭力天平（上海良平仪器仪表有限公司）。 1.3原理 蛋白质是CS中最主要的杂质之一，碱提取有利于破坏CS与蛋白质之间的结合，释放CS[3]；酶解处理使蛋白质进一步水解，然后调pH使之沉淀。过滤除去蛋白质，最后乙醇沉淀得到CS。由于新疆气候寒冷，软骨中脂肪含量及熔点高于温暖地区，使用普通工艺生产因脂肪常除不尽而影响产率及产品质量，因而脱脂环节成为寒冷地区CS生产的重要因素。在生产工艺中加入碱洗强化了脱脂工艺，形成新的“双碱复合酶法”生产工艺。 1.4方法 新疆CS生产厂家大都采用浓碱-酶解法传统工艺生产CS[4]，其工艺流程如下。 在寒冷地区生产CS，碱解、酶解和脱脂是提高CS产率及质量的3个关键步骤，影响因素较多。我们在原有生产工艺的基础上，针对这3个重要环节，选择浸泡时间、碱洗、复合酶比例、双氧水浓度、用盐量5个有显著影响的因子，进行浓度梯度实验对比分析，从中优选最佳范围，修改原有工艺，总结出适合寒冷地区生产的新的CS生产工艺。 2结果与讨论 2.1浸泡时间对产品产率、含量及质量的影响 新疆地域辽阔，牲畜屠宰点较为分散，屠宰量较小，收购新鲜软骨成本过大，因此软骨原料多以干品形式存放。此外，新疆气候干燥，干软骨的含水量低。传统工艺中干软骨的浸泡时间为24 h不适于新疆的生产。延长浸泡时间使产率明显提高，结果见表1。由表1可见，浸泡60 h为最佳时间，夏季应注意防腐。 2.2碱洗对产品产率、含量及质量的影响 常用的生产工艺中有3次过滤，如果滤液中有较多油脂成分，会影响过滤速度和过滤质量，甚至阻塞滤孔。因此，过滤须充分脱脂。新疆畜产品的脂肪含量及脂肪熔点均较其他地区高，用一般的高温脱脂方法不能有效地除去脂肪。由于软骨干制品在存放过程中油脂不断外溢，且用碱清洗不会分解出软骨内的CS。因此，在浸泡软骨前选择碱浓度、碱洗温度、碱洗时间3因素，分3个水平设计正交试验[5]，以产率和含量作为分析指标，见表2、表3。 正交试验结果表明，4号试验的产率最高；而7号试验产品的CS含率最高。再从单个因素的对产品产量及含量的影响分析看：2%的碱、25 ℃、处理15 min是脱脂最佳条件。 2.3复合酶组成比例对产品产率、含量及质量的影响 由于与CS连接的蛋白质种类较为复杂，使用单一的胰蛋白酶难以彻底去除。因此，同时加入碱性蛋白酶构成复合酶进行酶解，去除蛋白质的效果显著增强[6]。需去除蛋白质种类复杂，选择5种配比进行对比实验，结果表明，胰蛋白酶与碱性蛋白