细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对肿瘤识别及治疗.docVIP

细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对肿瘤识别及治疗【中图分类号】R733 【文献标识码】A 【文章编号】1672－3783(2011)09－0037－01 【摘要】目的 预测人乳头瘤病毒（HPV）16型E6 E7癌蛋白的HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）表位。方法 采用超基序法与量化基序方案相结合的办法，对目的蛋白HPV-16E6 E7的HLA-A2限制性CTL表位进行预测。结果 E6、E7各发现3个HLA-A2限制性CTL表位。结论 超基序法与量化基序方案联合应用可以提高预测效率。? 【关键词】 HPV-16 E6E7；HLA-A2；T淋巴细胞表位；预测；超基序；量化基序 近年来肿瘤特异性免疫治疗的研究迅速发展，其基本原理是根据细胞毒性T淋巴细胞（CTL）可以特异性识别存在于肿瘤细胞表面的抗原多肽（这种识别受MHC-Ⅰ类分子限制），当肿瘤抗原多肽在抗原提呈细胞（APC）的作用下以MHC-肽分子复合物的形式被呈递于APC表面时被CTL所识别，同时CTL也被激活增生分化为具有杀瘤活性的CTL，从而特异杀伤肿瘤细胞。基于这一理论基础，肿瘤抗原的发现以及CTL表位鉴定成为特异性免疫治疗及多肽疫苗研制的重要前提。细胞免疫尤其是CD8+ CTL细胞亚群在抗胞内寄生菌、病毒、某些真菌感染及抗肿瘤免疫中起着十分重要的作用。国内外学者结合CTL的这些特点以及CTL表位的研究情况，以CTL表位为基础进行疫苗设计，希望能够诱导机体产生保护性CTL免疫应答从而预防和治疗疾病。 ? 多肽疫苗是针对T细胞和某些B细胞的免疫表位而设计的。T细胞识别抗原是靶细胞或抗原呈递细胞MHC-Ⅰ类或Ⅱ类分子呈递的由8～12个氨基酸组成的多肽。已知HPV-16E6 E7是HPV相关肿瘤特异性肿瘤排斥抗原，含多个线性B细胞表位、CD4+ T细胞表位和CD8+ CTL表位，与MHC分子亲和力高，抗原性强，是HPV疫苗设计公认的靶抗原［1］；而且在HPV肿瘤细胞中表达的主要是癌蛋白E6 E7，因此对HPV-16 E6 E7的CTL表位进行预测并制备其相应的多肽疫苗是十分有意义的。同时由于HPV-16 E6 E7 CTL表位可以被HLA-A2、HLA-A3分子递呈，而我国HLA-A2阳性人群高达53%［2］，故预测HPV-16E6 E7 HLA-A2限制性表位就更具有现实意义。本研究采用超基序法与量化基序方案相结合，拟预测由9个氨基酸残基组成的HLA-A2限制性CTL表位，为多肽疫苗的研制提供理论基础。? 1 材料与方法? 1.1 目的抗原 肿瘤抗原选用HPV-16 E6 E7蛋白，由E6：158个、E7：98个氨基酸残基组成。? 1.2 CTL表位预测的超基序方案: 对于某一HLA分子，其结合抗原肽的锚定氨基酸残基性质不同，这种特征结构称为HLA分子的等位基因特异性抗原肽一致性基序，但不少属于同一HLA家族，甚至不同家族的HLA同种异型分子所接纳的抗原肽可有相同或相似的锚定氨基酸残基，这种特征称为结合抗原肽的超原序。现已根据HLA-Ⅰ类分子接纳抗原肽的肽基序，将HLA-Ⅰ类分子归纳为4个超基序家族，即A2、A3、B7和B44［3］。HLA-A2型所接纳的抗原肽具有相同或相似的锚定氨基酸残基，即肽链2位（P2）与羧基末端的氨基酸残基（P9）应是丙氨酸（A）、异亮氨酸（I）、亮氨酸（L）、蛋氨酸（M）、缬氨酸（V）或苏氨酸（T）。? 1.3 CTL表位预测的量化基序法 : 量化基序法的原理是在抗原肽与HLA-A2分子的结合中，抗原肽的侧链效应（锚定，抑制或中性），主要依赖于相应的氨基酸残基在肽中所处的位置，而受相邻的氨基酸残基影响较小。在一定的范围内，可以假设一个多肽序列中每个氨基酸残基相互独立且影响整个肽与MHC-Ⅰ类分子的结合，而该抗原肽的结合能就是每个位置氨基酸残基结合能的综合。基于这种假设，1993年Parker［4］等用肽结合实验分析了154个九肽与HLA-A2分子和亲和力，并得到一个包含180个系数的结合矩阵（见表1），其中每一个系数反映了相应氨基酸残基在该位置时与HLA-A2分子的结合能。对于某测定多肽，各位置相应氨基酸残基结合系数相乘再乘标准系数0.151，即为该多肽与HLA-A2的结合力。当结合系数≥5时，可以确定为与HLA-A2分子结合稳定，反之认为结合不稳定。本研究采用HLA-A2分子的结合矩阵，对超基序法预测出的CTL表位进一步采用量化基序进行验证，以寻求结合最好的表位。? 2 结果? 2.1 超基序方案预测结果 根据超基序方案，预测出E6 5个、E7 15个候选表位九肽，随后对预选出的HLA-A2限制型表位进行量化处理，寻找最好的结合。? 2.2 量化基序法预测结果 : 利用九肽矩