细胞膜色谱法及其在药理学探究中应用进展.docVIP

细胞膜色谱法及其在药理学探究中应用进展(1．广州中医药大学第一临床医学院，广东广州510405；2．广州中医药大学药理教研室，广东广州510405；3．浙江大学理学院化学系，浙江杭州310027) 摘要：细胞膜色谱法是研究药物与受体之间相互作用的一种新型亲和色谱技术，将药物在体内的作用过程在色谱柱内进行动态模拟。随着CMC法研究的深入，为天然植物药中有效成分的提取，中药复方的定性定量分析等方面提供了实验依据，为研究药物与受体作用及创新药物的高通量筛选提供了细胞水平筛选平台。文章简要综述近年来细胞膜色谱法及其在药理学中的应用进展。 关键词：细胞膜色谱法；高效液相色谱法；有效成分；细胞膜；受体 中图分类号：R285　文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2007)05-0983-03 细胞膜色谱法(cell membrane chromatography，CMC)是贺浪冲教授创建的一种研究受体与药物相互作用的新型亲和色谱技术方法，将高效液相色谱、细胞生物学与受体药理学相结合，利用药物与膜受体间存在的特异性亲和力，成功地将药物在体内的作用过程在色谱柱内进行动态模拟。CMC法是将活性组织细胞膜固定在特定载体表面，制备成细胞膜固定相(CMSP)。以缓冲溶液为流动相，药物为溶质或填加在流动相中，用液相色谱法在动态条件下研究药物与固定相上细胞膜及受体的相互作用。药物可不经提取分离步骤，直接在相应的CMC模型上完成筛选过程。并且药物在CMC模型中的保留特性(容量因子)和其药物的作用有显著的相关性。CMC方法具有操作简便、稳定可靠、高效灵敏的优点，其筛选系统为药物研究的高通量筛选提供细胞膜筛选平台。现已将CMC方法运用至药理学研究的多个方面，其中将CMC模型与药效实验结合的活性成份筛选技术已用于天然植物和中药物质基础的研究、药物与受体相互作用的研究、中药及其复方制剂的质控等方面。本文对CMC法及其在药理学中的应用进展展开综述。 1筛选天然植物药中的有效成分 天然植物药中成分复杂，应用天然药物分离提取方法筛选其中特定的有效成分周期长，命中率相对较低，而CMC法不经提取分离步骤，直接在模型上确定药物的某种活性成份，具有方法快速、简捷、命中率高的特点。以当归为例，当归具有补血活血、调经止痛等功效。现代中药药理学研究表明，当归具有扩张血管和降血压的作用。赵惠茹等人将细胞膜悬浊液在低温低压条件下结合制备成血管CMSP[色谱柱：50mm×2mm，流动相：50mmol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)；流速：0.5mL/min；检测波长：236nm；柱温：37℃]，取当归药材依次用不同极性的溶剂石油醚、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、水提取，发现乙醚提取物(DG-2)在血管CMSP柱上的保留特性(容量因子)与维拉帕米的相近。随后将DG-2进行普通柱层析分离(以硅胶为填料，将DG-2上柱分离，采用石油醚－乙酸乙酯梯度下行洗脱方法，分别等体积收集洗脱液，回收溶剂。)结果发现DG-21和DG-22馏份的样品有类似于当归乙醚提取物的保留特性。最后进行离体药效实验发现，DG-21对去甲肾上腺素所诱发的血管收缩有类似竞争性拮抗剂作用，能明显抑制血管的收缩；而DG-22作用则较弱。这就表明DG-2是当归对血管有舒张作用的有效部位，DG-21则是其有效成分。梁明金等人进一步研究结果表明：当归脂溶性部位经柱层析分离得到的正己烷－醋酸乙酯洗脱部位为有效部位，其中藁本内酯、邻苯二甲酸二甲酯和邻苯二甲酸二乙酯等是当归中对兔主动脉血管有生理活性的有效成分。丹参、红花、红毛七、菟丝子、淫羊藿根、川芎、白芷、长春七、太白花等植物药也运用不同组织的CMC模型进行了有效成分的筛选。贺浪冲等人运用CMC法从白芷、川芎等中药中筛选出的有效成分制成复方制剂――白川胶囊，具有明显的急慢性降压作用，为创新药物研究开发奠定了基础。 2研究药物与受体的亲和作用 研究药物与受体相互作用长期以来一直运用细胞膜放射性配体分析技术(RBA)和离体器官受体功能分析方法。但前者不能直接反应药物与受体作用的类型和立体选择性，而且对环境造成同位素污染，后者研究效率又较低。CMC法作为受体药理学一种新实验研究方法，通过将细胞膜受体固定于硅胶载体表面，用高效液相色谱研究受体和配体的特异结合。该方法简便易行，细胞膜色谱柱可以反复应用，使受体研究和药物筛选效率得到提高，可用于药物高通量筛选。但CMC法结合参数是否能准确反映受体药物的亲和力还需要结合经典受体动力学方法进行检验。候进等人将CMC法与RBA法进行比较和研究表明：7种配体对心肌、小肠平滑肌和大脑细胞的M胆碱能受体的放射性亲和力与色谱保留参数排序完全相同，并具有明显相关性。CMC法与功能受体动力学方法对比研究表明：5种α肾上