绵阳地区轮状病毒感染性腹泻血清学分型探究.docVIP

绵阳地区轮状病毒感染性腹泻血清学分型探究摘 要 目的：了解绵阳地区轮状病毒感染的流行情况、血清型情况。方法：采用双抗夹心ELISA技术检测RV抗原，采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对RV病毒株进行血清学鉴定。结果：对222例标本进行ELISA法检测，RV阳性121例，阳性率54.5%；血清型检测共测得G1 36例(29.75%)，G2 15例(12.37%)，G3 45例(37.19%)，G4 19例(15.70%)，G9 3例(2.47%)。另有3例未能用现有引物分型。结论：轮状病毒是引起绵阳地区婴幼儿病毒性腹泻的主要原因，绵阳地区流行的RV以G1型为主，其次为G3型。 关键词 轮状病毒感染 血清学 分型 doi：10.3969/j.issn.1007-614x.2009.03.072 轮状病毒(RV)是人和动物病毒性腹泻的最主要原因。RV属于呼肠孤病毒科，基因组为双股RNA，由11个基因片段组成，目前已知轮状病毒可分为7个组(A～G)，以A组所导致的婴幼儿腹泻最为常见[1、2]。发病高峰期在每年的秋季和初冬季节，是婴幼儿的常见病。 资料与方法 2006年12月～2007年12月我院就诊婴幼儿腹泻222例(肉眼脓血便除外)，其中男126例，女96例，平均年龄12.23±7.14个月。所有粪便标本均做细菌培养及镜检以除外细菌性肠炎。标本置-86℃低温冰箱保存备用。 方法：用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测RV抗原，采用IDEIA Rotavirus试剂盒，按说明书操作。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对RV病毒进行血清学鉴定。 统计学方法：采用SPSS 11.0进行统计，计量资料用X±S表示，两组间比较采用t检验，计数资料采用X2检验。 引物设计：所用引物见表1，方法参照JORGE F法改进后进行[2]，扩增A组轮状病毒VP97基因第51～329为核苷酸片段，引物序列如下： 上游引物P1：5-GRARGGTATTGAATATACCAC-3’ 下游引物P2：5-GATCCTGTTGGCCATCC-3’。 结 果 RV检测结果：本研究共采集绵阳市人民医院就诊婴幼儿腹泻粪便标本222例进行检测，ELISA法检测RV阳性121例，阳性率54.5%。其中住院病人88例，门诊病人33例。男67例，年龄10.97±6.67个月；女54例，年龄11.37±5.69个月。经t检验，显示两组间年龄差异无统计学意义(P0.05)。见表2。 阳性患儿腹泻时间分布：我们将经ELISA法检测为RV阳性的患儿，按照腹泻月份进行分组研究，发现发病高峰集中在2006年12月份和2007年10、11、12月份。经X2检验显示不同月份的阳性检出率差异有显著性意义(P23个月的婴幼儿RV检出率较低，与国内相关报道一致[4]，该结论支持了母体抗体对RV感染具有保护作用的观点，也提示了RV疫苗的适应对象为2岁适宜。 轮状病毒属呼肠孤病毒属，基因组由11个双链核糖核酸(dsRNA)节段组成，分别编码病毒的6个结构蛋白(VP l～4、VP6、VP7)和5个非结构蛋白(NSP l～5)，其中4种蛋白VP6、VP7、VP4及NSP4具有重要作用。根据VP6抗原性不同可分为7组(A～G组)，其中A组RV主要引起婴幼儿和新生动物的重症腹泻。VP7的抗原特异性与编码基因的核苷酸序列有关，其血清型与基因型的划分相一致，根据VP7特异性不同将RV分为不同的G血清型，至今已发现14个G血清型(G1～G14)，其中G1～G4为主要的流行株。本研究发现绵阳地区轮状病毒的主要流行型为G1和G3，此外还检测出了少量G2、G3、G4、G9型。此结果与其他地区报道不同，上海地区以G1为主，兰州地区以G3为主，这说明轮状病毒的感染存在地域差异。本研究仍有未分型病例，可能原因：①可能为其他的G型感染，暗示可能有新型别和新“G-G”组合的出现。G型分布随时间不同而发生变化的情况见于不同国家和地区[5]。近年来世界各国报道RV异常病毒株感染有增多趋势，相继发现了G5、G10、G8、G12等型[6]，可能与不同毒株之间的基因重组或由动物传播给人等因素有关。②由于粪便中含RNA酶抑制剂或部分标本中病毒dsRNA降解和含量太少，因此RT-PCR不能对部分RV dsRNA进行扩增。 本研究时间仅为1年，样本量有限，相关的研究有待进一步深入。 参考文献 1 金奇.医学分子病毒.北京：科学出版社，2001：540-565. 2 方肇寅，晋圣瑾，秦树民，等.PCR方法用于我国A组轮状病毒的分型研究.病毒学报，1994，10(4)：316-321. 3 胡亚美，江载芳，诸福棠.实用儿科学.北京