联合中药消积煎剂综合治疗对顺铂耐药卵巢癌体外作用实验探究.docVIP

联合中药消积煎剂综合治疗对顺铂耐药卵巢癌体外作用实验探究摘要：目的：进行体外药物敏感试验，应用综合治疗方案提高化疗药物的敏感性，探索克服卵巢恶性肿瘤抗药性，提高患者生存率的有效途径。方法：将消积煎剂(0.5、5、50mg／mL)、热疗(42℃)和顺铂(6、12、24p,g／mL)分别单独以及联合作用于体外培养的人卵巢癌CAOV3／cDDP细胞株。采用MTr(methyl tlliazolyl tetrazolium)法检测各实验组人卵巢癌耐药细胞株cAOV3／cDDP的生长押制率；采用集落形成实验观察各实验组对人卵巢癌耐药细胞株CAOV3／cDDP的诱导分化作用；应用光镜观察实验处理前后人卵巢癌CAOV3／cDDP细胞形态和结构的变化，确定凋亡细胞，评价各组细胞凋亡程度。结果：消积、热疗和顺铂3种疗法同时应用。结果显示为很明显的协同作用(P50个细胞的克隆数。取3个复孔均值，按下式计算集落形成率。 集落形成率(％)=(实验组集落均数／空白对照组集落均数)×100％ 2.3　细胞形态学观察将严格清洗、浸酸、消毒的洁净盖玻片，置于直径60ram的无菌培养皿中，加人1×103个／mL的CAOV3／cDDP细胞悬液，待细胞生长良好。进入指数增生期后，进行随机分组，空白对照组及每一实验组均设3个培养皿。 经实验处理后，将盖玻片捞出，PBS液漂洗2次，95％酒精室温固定20－30min，0.05％瑞氏一吉姆萨染色15－30mln，冲洗晾干，二甲苯透明后，直接反转，放于洁净载玻片上，树胶封片。光学显微镜观察，确定凋亡细胞。 2.4　数据处理　采用F检验，t检验，SPSS11.0统计软件包进行统计分析。 3　结果 3.1　卵巢癌CAOv3／cDDP细胞生长抑制率中药消积煎剂对顺铂化疗具有增敏作用，且随消积煎剂浓度的增高，这种作用表现的更为显著。详见表1。 3种疗法联合应用组，对肿瘤细胞的生长抑制率较顺铂化疗组相比明显提高P0.05。详见表2。 3.2　卵巢癌CAOV3／CDDP细胞集落形成率集落形成率结果，详见图1。实验组较对照组相比集落生长特性明显降低，细胞呈单个生长状态，且单个集落中细胞数显著少于对照组(见图2－3)。说明消积煎剂与顺铂有明显的协同抗肿瘤作用，具有逆转肿瘤细胞向正常细胞转化的能力，且随着药物浓度的增高，这种作用表现的更为显著。而3种疗法联合应用又明显优于其他疗法。此实验结果同MTT检测的结果相一致。 3.3　细胞形态学变化　相差显微镜、光镜观察发现，凋亡细胞变化特征有两种：一种为间期凋亡特点，细胞核染色质固缩、聚集与核边、胞浆浓缩、有空泡形成；另一种为分裂期特征，主要为染色体散乱分布于细胞中、细胞膜出泡、进而染色体聚集成团、形成凋亡小体，到后期凋亡小体及残留的凋亡细胞进行次级坏死。 细胞经瑞氏一吉姆萨染色后，光镜下观察。实验组可见凋亡细胞，而且3种疗法联合应用组其凋亡细胞的发生率随之增高，且凋亡细胞的形态结构越发典型(见图4～5)。 4　讨论 消积煎剂是在辨证立法的基础上选药配伍组成的，是一种行之有效的中药合剂。它由半枝莲、夏枯草、莪术等多味具有抗肿瘤作用的中药组成，体现了中医辨证用药的精华一调节人体内环境，在治疗中起到多部位、多靶点的作用。 根据现代中药药理学理论，莪术中提取的萜类成分β－榄香烯及莪术醇等均具有抗肿瘤作用。半枝莲具有抗癌、抗炎、抗菌作用。苦参具有免疫促进作用，此外其有效成分苦参碱、槐果碱亦有抗癌活性。白花蛇舌草的促进免疫作用及抗诱变作用，提示其具有抗肿瘤活性。山慈菇含有秋水仙碱等多种生物碱，其对多种肿瘤均有抑制作用。夏枯草对免疫具有较好的双向调节作用，其所含的熊果酸及衍生物对肿瘤细胞具有显著的细胞毒性作用。黄芪不仅具有免疫抑瘤作用，还存在直接抗癌的有效成分，其中黄芪多糖及成分f3可增强LAK细胞细胞毒效应，从而提高机体的免疫功能，增强机体的防癌作用。黄芪中富含的硒能抑制癌细胞的氧化磷酸化作用，对于大部分癌细胞有抑制作用。红参中的人参皂苷－Rh2，具有较强的抗肿瘤活性，并能使癌细胞再分化诱导逆转成非癌细胞。人参多糖能增强网状内皮细胞的吞噬功能，刺激血液中补体和抗体的生成。增加血液中免疫球蛋白的含量，从而增强机体的防御功能。 顺铂、热疗和消积煎剂联合应用的前景是令人鼓舞的，本实验研究也证实了这一点。本实验结果显示，消积煎剂对顺铂化疗及热化疗均具有增敏作用；高浓度(50mg／mL)消积煎剂配合热疗对化疗药的增敏作用极其显著；高浓度消积煎剂配合热疗还可大大降低化疗药顺铂的使用浓度。因此，3种疗法联合应用在临床上具有非常重要的实际意义，可提高低浓度小剂量化疗药物的疗效，与以往高浓度大剂量单独化疗相比，大大减轻了化疗药物的毒副反