聚丙烯酰胺水凝胶中丙烯酰胺单体提取及HPLC测定.docVIP

聚丙烯酰胺水凝胶中丙烯酰胺单体提取及HPLC测定[摘要]目的：建立聚丙烯酰胺水凝胶(PAMG)中丙烯酰胺(AM)单体提取及检测的高效液相色谱(HPLC)分析方法。方法：用水做提取剂对PAMG中的AM进行提取，采用Oasis HLB 6cc和Varian Bond Elut－Accucat固相萃取柱对样品进行纯化，以HPLC测定其含量。结果：未植入人体PAMG中AM含量为0.2－0.8μg/ml，从人体中取出PAMG中AM含量均低于最小检出限0.05μg/ml。结论：本方法适用于PAMG中AM单体含量的检测，具有操作简单、灵敏、准确等优点。 [关键词]聚丙烯酰胺水凝胶；丙烯酰胺；高效液相色谱 [中图分类号]R92 7 [文献标识码]A　[文章编号]1008－6455(2007)07－0888－03 聚丙烯酰胺水凝胶(PAMG)于1997年由乌克兰引入我国后，广泛应用于注射隆乳。而后由于出现移位、硬结、疼痛、无菌性炎症等多种术后并发症，国家食品药品监督管理局于2006年4月全面禁止医用PAMG在国内的生产与销售。有研究表明聚丙烯酰胺在多种条件下可以发生一定程度的降解，如光降解、热降解、化学降解、生物降解等，而人体组织是一种复杂的生物有机环境，因此考虑PAMG在人体中可能发生降解。由于合成PAMG的丙烯酰胺(AM)单体已被证明对人体具有神经毒性及可能的生殖毒性、致癌性，因此分析植入人体内PAMG中AM的含量就变得至关重要。 1　材料和方法 1．1　样品来源：从5位患者体内抽出的医用PAMG(奥美定，吉林富华医用高分子材料有限公司)；患者均为女性，2006年就诊于西京医院整形外科，因注射隆乳术后发生术后并发症要求手术取出植入物，年龄29－38岁，PAMG植入时间2－5年，并发症有单侧或双侧乳房的疼痛、硬结、移位等，抽出物均为淡黄色、半透明、凝胶状颗粒。 1．2　仪器与试剂：HP1100型高效液相色谱仪(Agi－lent公司，美国)；AL204电子天平(上海梅特勒－托利多仪器有限公司)；BR4i高速台式离心机(Thermo Electro公司，美国)；MTN－2800D氮吹浓缩仪(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)；Oasis HLB6cc (200mg)固相萃取柱(Waters公司，美国)：Bond Elut－Accucat (mixed mode，C8，SAX andSCX)3ml固相萃取柱(Varian公司，美国)；大旋转过滤管，0.45txmPVDF(Alltech公司，美国)；SKY－100B恒温培养摇床(上海苏坤实业有限公司)。丙烯酰胺(99.5％，优级纯，陕西中美生物科技有限公司)；甲醇(色谱级，Fisher scientific公司，美国)。 1．3　提取及净化方法：准确称取0.1g医用PAMG产品于15ml离心管中(从人体取出的PAMG需称取1g，原因见结果与讨论)，加入蒸馏水至10ml，置于37℃恒温培养摇床中振荡72h后，取出离心(9000r/min)30min，取上清液2ml，经0.45μm滤膜(9000r/min)离心过滤5min，使液体完全通过滤膜；然后取1.5ml分别经Oasis HLB 6cc和Varian Bond E－lut－Accucat同相萃取柱(使用前均需活化)萃取净化，最终得到1ml洗脱液；经氮吹仪吹干后加入50μl蒸馏水重新溶解，供液相色谱测定。 1．4　HPLC分析条件：色谱柱：Angilent TC－C18，4.6mm×150mm，粒度5μm；流动相：100％水；流速1ml/min；柱温为室温；检测波长210nm；进样量20μl。 2　结果与讨论 2．1　检测方法的选择：近年来在食品行业中，由于食品中的AM含量受到全世界的广泛关注，目前已经建立了多种微量AM的提取及检测方法，主要有GC－MS/MS，LC－MS/MS等，这些检测方法的特点是成本高、操作复杂；另外，PAMG大分子的交联结构决定了它无法溶于水，从而导致对其分子结构的分析方法有限，也使得提取PAMG中可能含有的AM单体比较困难。因此，本实验采用高效液相色谱(HPLC)来检测PAMG中的AM，HPLC是一种常规的化合物检测方法，特点是操作简便、参数易于调整、经济适用，有利于PAMG中AM提取条件的摸索。国内已有部分学者用HPLC对PAMG中的AM进行了提取及检测，但这些方法存在一些不足，如AM的提取过程复杂、HPLC图杂质峰较多等，且从人体中取出的PAMG由于与体液进行交换而含有多种复杂化学成分，影响AM的纯化。本文借鉴食品中AM的提取方法，摸索适合于PAMG中AM的提取及检测方法。 2．2　样品称取量的确定：由于医用PAMG产品仍可吸收大量水而继续溶胀，0.1g样品在1