肉苁蓉多糖对骨髓抑制性贫血小鼠造血调控实验探究.docVIP

肉苁蓉多糖对骨髓抑制性贫血小鼠造血调控实验探究陈志伟　祝彼得　许惠玉 摘　要：目的：观察肉苁蓉多糖对骨髓抑制贫血小鼠造血功能的影响，探讨其造血调控作用机制。方法：采用C600照射和注射环磷酰胺复合制备贫血小鼠模型。应用流式细胞术(FCM)检测肉苁蓉多糖对骨髓抑制贫血小鼠骨髓细胞周期的影响，采用造血祖细胞培养术观察三系造血祖细胞集落数。结果：低剂量和高剂量肉苁蓉多糖能明显促进骨髓G0/G1期细胞向S期细胞以及S期细胞向G2/M期细胞的转化，G2/M期细胞比例明显升高，增殖指数(PI)也明显升高。给药组CFU－E，BFU－E，CFU－MeG与贫血对照组集落数有显著差异。结论：肉苁蓉多糖可能通过促使骨髓抑制贫血小鼠骨髓细胞细胞周期的转化，促进骨髓造血功能的恢复，并促进红系巨核系造血。 关键词：肉苁蓉多糖；膏髓抑制性贫血；小鼠 中图分类号：P,285.5；R331.2　文献标识码：A 文章编号：1673－7717(2007)07－1473－02 严重的骨髓抑制性贫血常可由放、化疗引起，其对人类和动物会造成造血系统机能的损伤。肾中精气是血的化源之一。当肾中精气不足时，可导致血液生成不足而形成血虚的病理变化。肉苁蓉是经典的补肾药，具有补肾阳、益精血、润肠通便等功效，在临床常用于辅助治疗各种因素造成的贫血。肉苁蓉多糖为肉苁蓉的主要成分。本实验运用血液实验技术，观察肉苁蓉多糖对骨髓抑制贫血小鼠的骨髓有核细胞周期变化，各系造血祖细胞集落产率等的影响，探讨肉苁蓉对骨髓抑制性贫血小鼠造血的影响，对肉苁蓉多糖的作用机理进行探讨。 1　材　料 1．1　实验动物8－12周龄BALB/c纯系雄性小鼠40只，体量18－22g，由成都中医药大学实验动物中心提供。 1．2　试剂 肉苁蓉多糖，湖南九汇制药厂提供；环磷酰胺(上海华联制药有限公司产品Lot031110－2)；RNA酶、碘丙啶(PI)荧光染液(美国Sigma公司产品Lot A108354)；1640培养基(Gibco公司)，促红细胞生长激素(Frythropoi-etin，成都地奥)，IL－3、粒单系集落生长刺激因子(mGM－CSF，Riche公司)，促血小板生长激素(Thrombopoie－tin，RD公司，美国)。 1．3　仪器Co60γ源(四川省农业科学院辐照场提供)，流式细胞仪(FACScan，Beckman公司)四川省人民医院。 2　方　法 2．1　动物模型制备小鼠经2.0Gy Co60照射后的第3天开始每天腹腔注射环磷酰胺(CTX)50mg/kg(于临用前配制)，连续给药3天完成骨髓抑制性贫血模型制备。 2．2　实验动物造模及分组将实验小鼠分正常对照组、模型组、肉苁蓉多糖低剂量组和高剂量组，每组10只。除正常对照组外，其它3组均进行造模。小鼠造模完成的第2天开始给药，正常对照组和模型组每只小鼠腹腔注射0.2mL/d的生理盐水；低剂量和高剂量肉苁蓉组分别给肉苁蓉50mg/kg和100mg/kg，每只小鼠腹腔注射0.2mL/d，共给药7天。 2．3 流式细胞仪测定细胞周期单个骨髓细胞悬液离心(1000r/min,5min)，弃上清，用PBS洗涤2次，去上清液，滴70％乙醇隔夜固定细胞，立即混匀，用封口膜封口。置4℃冰箱冷藏备用。取细胞样品，用PBS洗两次，以洗去残留的乙醇，加100μLPBS后混匀，每管加PI染液1mL，避光染色30min，上流式细胞仪检测细胞周期的变化。 2．4　本实验室常规培养方法制备骨髓有核细胞单细胞悬液，每孔BMC终浓度为1×105/mL，根据各自体系分别对粒系(CFU－GM)，红系(BFU－E，CFU－E)、巨核系(CFU－Meg)祖细胞培养。 2．5 统计学处理实验所得数据用X±s表示，各组数据先行方差齐性检验，再进行单因素方差分析α=0.05。SPSS11.5软件分析结果。 3　结　果 3．1　肉苁蓉多糖对小鼠骨髓细胞周期的影响，见表1。由表1可见，各组骨髓细胞以 G0/G1期为主，与正常对照组相比，模型组、低剂量和高剂量肉苁蓉多糖组G0/G1期细胞比例有不同程度的减少，但低剂量和高剂量肉苁蓉多糖组细胞其差异无统计学意义。G2/M期细胞在低剂量和高剂量肉苁蓉多糖组有所增加，模型组有所增加，其差异有统计学意义(P＜0.05)；说明模型组G2/M骨髓细胞明显阻滞，其中低剂量和高剂量肉苁蓉多糖组细胞S期细胞比例有不同程度的增加与模型组比较明显增加(P＜0.05)。肉苁蓉多糖似乎更倾向于促进细胞由G0/G1进入S期以及S期细胞向G2M期细胞转化，促进骨髓细胞DNA的合成作用。 3．2肉苁蓉多糖对贫血小鼠造血祖细胞集落形成的影响见表2。贫血小鼠骨髓有核细胞(BMC)形成