脂肪来源干细胞在脂肪移植中作用及其临床应用进展.docVIP

脂肪来源干细胞在脂肪移植中作用及其临床应用进展长期以来,对于各种原发的和继发的软组织缺损的治疗一直是困扰整形外科医生的难题之一。自体脂肪作为一种软组织填充物,由于其诸多的并发症曾一度被人们放弃,但随着组织工程技术及细胞生物学的不断发展,自体脂肪移植又逐渐被人们认可。现将脂肪干细胞在脂肪移植中的作用及其临床应用现状综述如下。 1脂肪移植的发展概况 20世纪初,自体颗粒脂肪移植开始应用于临床,由于其吸收率高、存活率低,且并发症较多,限制了其在临床中的应用。21世纪初,通过改进脂肪获取技术,加速了脂肪血管化,提高了脂肪颗粒移植的成活率。但是坏死、吸收仍然是颗粒脂肪移植的主要并发症。1998年,Coleman发明了结构脂肪(liposuction)移植技术,即在脂肪移植的整个过程中保证脂肪细胞具有更多的完整性和活性,也就是后来所说的Coleman技术,使脂肪移植的存活率有了很大的提高。而自Zuk等[1]首次从自体脂肪组织中分离获得具有多向分化潜能的细胞―脂肪来源干细胞(Adipose-derived stem cells,ASCs)以来,其研究越来越深入,因为其来源丰富,取材方便,且组织中干细胞含量丰富,因而ASC被认为是组织再生和修复的理想细胞来源,可为多种疾病的治疗提供充足的种子细胞[2]。近年来,随着组织工程技术的迅速发展,为克服常规注射颗粒脂肪移植的问题,如吸收、囊肿、硬结等,Yoshimura等[4]又发明了细胞辅助的脂肪移植术(cell-assisted lipotransfer,CAL),为脂肪移植提供了一种更为可靠的方法。该技术是将自体脂肪来源干细胞(Adipose-derived stem cells,ASCs)与脂肪细胞混合,联合注射移植。 2脂肪移植中的细胞基础 脂肪组织通常被认为是贮存能量及内分泌器官,是软组织填充和吸脂处理的必要组织。同时还被认为是成体干细胞的有效来源,因为脂肪组织含有多种的祖细胞,可分化为多种谱系[3]。脂肪组织中主要包含脂肪细胞、ASCs、血管内皮细胞、壁细胞、成纤维细胞、巨噬细胞及细胞外基质等[4],其中脂肪细胞和ASCs是近年来研究的热点。脂肪细胞是脂肪组织的基础,其体积占总体积的90%以上,但数量却少于50%[5-6]。ASCs被认为是一种表现脂肪细胞和血管细胞的祖细胞[7],它位于脂肪细胞之间、血管周围或细胞外基质中,可促进脂肪组织的转归[8]。但脂肪组织的转归是一个很漫长的过程,成年人平均每年大约有10%左右的脂肪细胞被更新[8-9],而ASCs又存在于脂肪组织的间质血管碎片中(stromal vascular fraction,SVF)[10]。间质血管碎片(SVF)是干细胞辅助脂肪移植中最重要的组分。通过胶原酶消化,从脂肪组织中分离的多种细胞混合物形成的细胞团就叫做间质血管碎片(SVF)。间质血管碎片中含有丰富的间充质细胞,可分化为多种谱系的细胞,是再生医学、组织工程等最理想的种子细胞。获取SVF的方法主要是[5]将吸脂后的脂肪用PBS (phosphate-buffered saline)反复冲洗两次,然后在37℃条件下用0.075%的胶原酶消化30min,再用含10%胎牛血清的DMEM终止消化,1200g离心10min后就会获得高密度的SVF碎片[1]。其中主要包括间质细胞、血管内皮细胞和壁细胞。另外, SVF中也包括一些血管来源的细胞,如白细胞和红细胞等,而血管来源细胞的比率主要取决于个体出血的多少。在CAL中,不需经过人工的分选及培养,直接将分离的新鲜的自体SVF用来做脂肪移植补充物[11-12]。另外,有研究指出新鲜分离的脂肪干细胞与培养增殖的干细胞相比可能在治疗方面更具有安全性和有效性[4,13]。现在正在进行的一些临床试验也经常应用新鲜分离的SVF,而不是纯化或培养的ASCs。因为SVF包含其他细胞,如血管内皮细胞或巨噬细胞等,许多研究发现它们之间有一种协同效应[14-16]。 3ASCs在脂肪移植中的作用 脂肪移植后脂肪组织的存活和萎缩的机制并未得到证明。移植后无微血管的脂肪组织被安置于异位组织中―相对缺血区,最初几天的营养灌注来自于宿主组织周围组织,直到形成新的微血管。对于损伤的反应,损伤的宿主组织,特别是细胞外基质和死亡的细胞会释放FGF[16]。在修复过程中,脂肪细胞(对缺氧很敏感)在氧压低于其阈值的情况下24h内可能死亡。但是ASCs更能耐受缺氧,其在缺氧情况下可保持功能72h[17]。在动物模型的缺血再灌注损伤的脂肪组织中,ASCs在脂肪移植的修复过程中及在脂肪化和血管化中起着重要的作用[18],其可调节周围组织中生长激素及细胞因子的释放[19],并通过分泌各种生长因子如VEGF,IGF-1防止细胞凋亡[20]