腹腔注射利多卡因对切口痛模型大鼠自发痛行为及脊髓背角大麻素受体表达影响.docVIP

腹腔注射利多卡因对切口痛模型大鼠自发痛行为及脊髓背角大麻素受体表达影响利多卡因用于术后镇痛，一般都是通过硬膜外给药或者神经阻滞。但这些给药方法都是有创的，有很多相关并发症，如感染、硬膜外血肿等；而且很多病人无法实施，如凝血功能障碍、需要肝素治疗的术后病人［1］。研究发现静脉注射利多卡因可取得良好术后镇痛效果，但其作用机制还不清楚。本文通过切口疼痛模型大鼠，研究静脉注射利多卡因是否是通过脊髓背角CBR的表达而到达减轻疼痛的作用。 1.材料和方法 1.1 动物与分组：雄性SD大鼠30只，鼠龄8-12周，体重180-200g，由三峡大学实验动物中心提供，随机分成5组，正常对照组（A组）、手术切口组（B组）、利多卡因5mg/kg组（C组）、利多卡因10mg/kg组（D组）、利多卡因20mg/kg（E组），于术前30min腹腔注射，每组6只。利多卡因剂量参考对静脉注射利多卡因对神经病理性疼痛模型大鼠的长时程缓解作用的研究［2］。实验前在同一环境（室温20-24°C，避免强光及噪声刺激，自由进食和饮水）饲养。 1.2 切口疼痛模型的建立：在戊巴比妥麻醉下，将大鼠后肢进行消毒，按Brennan法建立切口疼痛模型：从足跟近端0.5cm处向趾部作一长约1cm的纵行切口，切开皮肤和筋膜后，用镊子挑起足底肌肉并纵向切割，但保持肌肉的起止和附着完整，按压止血后用细线缝合皮肤共2针即成切口疼痛模型［3］。 1.3 行为学观察：术后6h，采用累积疼痛评分法［3］评定疼痛行为的变化：待大鼠清醒后观察后爪着地及负重情况，后爪被压迫发白表示负重。后爪翘起不着地，计2分；后爪着地但不负重，计1分；后爪着地并且负重，计0分。每5min观察1次，每次观察1min，以1min内最常采取的姿势为标准，共观察1h（共记分0-24分）。以术侧足评分减去对侧足评分即为所得累积疼痛评分。 1.4 脊髓背角CBR的测定：术后10h，大鼠经腹腔注射戊巴比妥钠（60mg/kg）麻醉后，将切口痛模型大鼠与假手术组大鼠，同时用生理盐水和冷4%多聚甲醛经心快速灌注固定。继之取脊髓背角在4℃4%多聚甲醛中后固定过夜，复移入15%蔗糖溶液中，沉底后再移入30%蔗糖溶液，直至脑块再次沉底。然后用冰冻切片机作鼠脑连续冠状切片，片厚20μm。按ABC试剂盒说明书的步骤进行免疫组织化学反应。 1.5 药品和试剂：盐酸利多卡因注射液（浙江诚意药业有限公司，批。大鼠P物质ELISA试剂盒（由上海博蕴生物科技有限公司购得）。 1.6 统计学处理：所得数据以均数±标准差（χ±s）表示，采用SPSS16.0统计软件进行分析，组间比较采用单因素方差分析并以LSD法比较两两差异。P005认为差异有统计学意义。 2.结果 2.1 行为学改变：与A组相比，术后各时间点B组、C组、D组和E组的累积疼痛评分均明显上升（P001），说明切口痛大鼠模型制作成功。与B组相比，术后D组和E组的累积疼痛评分减低（P005）；C组与B组之间无明显统计学差别，说明静脉注射利多卡因能够减轻术后疼痛并且要达到一定的剂量。D组、E组的累积疼痛评分无明显统计学差别，说明增加到一定剂量后，再增加剂量不会增加其镇痛作用，（见表1）。 表1 累积疼痛评分比较（χ±S，n=6) 正常对照组(A) 手术组(B) 利多卡因5mg/kg组(C) 利多卡因10mg/kg组(D) 利多卡因20mg/kg组(E) 疼痛累积评分 1.5±1.2 19.3±2.0△ 16.1±1.4△ 12.3±1.9△＊ 13.1±1.7△＊ 注：△与正常组相比，P001；＊与手术组相比，P005。 2.2 脊髓背角CBR表达水平的变化：与A组相比，B组、C组、D组和E组脊髓背角CBR表达水平明显降低（P001），说明术后疼痛与脊髓背角CBR表达受到抑制有关。与B组相比，术后C组、D组和E组脊髓背角CBR表达水平增加（P005），说明疼痛的减轻与利多卡因促进脊髓背角CBR表达有关，（见表2）。 表2 脊髓背角NMDAR-NR1阳性细胞个数（χ±S） 正常对照组(A) 手术组(B) 利多卡因5mg/kg组(C) 利多卡因10mg/kg组(D) 利多卡因20mg/kg组(E) 脊髓NMDAR-NR1阳性细胞个数 92.7±12.3 20.4±4.1△ 47.2±9.7△＊63.8±13.5△＊ 48.4±6.9△＊ 注：△与正常组相比，P001；＊与手术组相比，P005。 3.讨论 利多卡因是一种酰胺类、中效局部麻药，局部应用起效快（3min-5min），达峰时间25min，持续时间60-90min，弥散广，穿透性强，