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基因工程 的工具 限制酶 主要存在于原核生物中 具有专一性(识别序列) 切开DNA分子的磷酸二酯键 DNA连 接酶 连接磷酸二酯键 种类 E.coliDNA连接酶 T4 DNA连接酶 载体 具备的 条件 质粒、λ噬菌体衍生物、动植物病毒 种类 能自我复制 有一个或多个酶切割位点 有标记基因 对受体细胞无害 思考与探究 P7 2、为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？ 通过长期的进化，细菌中含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列；或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。这样，尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的DNA被切断，并且可以防止外源DNA的入侵。 3、天然的DNA分子可以直接用做基因工程载体吗？为什么？ 提示： 基因工程中作为载体使用的DNA分子很多都是质粒（plasmid），即独立于细菌拟核染色体DNA之外的一种可以自我复制、双链闭环的裸露的DNA分子。 是否任何质粒都可以作为基因工程载体使用呢？ 不是，作为基因工程使用的载体必需满足以下条件： 思考与探究 P7 1） 载体DNA必需有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上去。这些供目的基因插入的限制酶的切点所处的位置，还必须是在质粒本身需要的基因片段之外，这样才不至于因目的基因的插入而失活。 2） 载体DNA必需具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制。 3） 载体DNA必需带有标记基因，以便重组后进行重组子的筛选。 4） 载体DNA必需是安全的，不会对受体细胞有害，或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去。 5） 载体DNA分子大小应适合，以便提取和在体外进行操作，太大就不便操作。 实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述条件，都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。 4、DNA连接酶有连接单链DNA的本领吗？ 迄今为止，所发现的DNA连接酶都不具有连接单链DNA的能力，至于原因，现在还不清楚，也许将来会发现可以连接单链DNA的酶。 思考与探究 P7 1)不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制 （ ） B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA D 练习 2）有关基因工程的叙述中，正确的是（ ） A、所有的限制酶只能识别一种特定的 核苷酸序列 B、质粒是基因工程中唯一的载体 C、载体必须具备的条件之一是：具有 多个限制酶 切点，以便与目的基因连接 D、DNA连接酶使黏性末端的碱基之间 形成氢键 C 练习 3）同一种限制酶切割成的黏性末端是 A. ①② B. ①③ C. ①④ D. ②③ A （10江苏卷）4.下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图l、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题： （1）一个图1所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割前后，分别含有 ▲ 个游离的磷酸基团。 （2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越 ▲ 。 （1）0、2 （2）高 （3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma Ⅰ切割，原因是 ▲ 。 （4）与只使用EcoR I相比较，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止 ▲ 。 （3）SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因 （4）质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化 （5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入 ▲ 酶。 （6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了 ▲ 。 （5）DNA连接 （6）鉴别和筛选含有目的基因的细胞 * 黑色：运载体。综色：目的基因。 * * 基因工程 第一节： DNA重组技术的基本工具 浚县一中 刘秀荣 　据WTO调查：2004年全世界因狂犬病致死人数约5.5万人 　中国卫生部通报：2004年７月，狂犬病列法定报告传染病死亡数之首。发病死亡率近100% . 能产生狂犬病抗体蛋白的转基因植物 基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人类需要的新的生