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变性(90-95℃) 复性(55-60℃) 延伸(70-75℃) (4)过程： 2.利用PCR技术扩增目的基因 ㈠目的基因的获取 1.从基因文库中获取目的基因 2.利用PCR技术扩增目的基因 3.通过DNA合成仪用化学的方法直接人工合成 若基因_____， 核苷酸序列______ 。 较小 已知 ㈠目的基因的获取 ㈡基因表达载体的构建——核心 1.作用 ①使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给子代 ②同时使目的基因能表达和发挥作用 2.组成 目的基因 启动子 终止子 标记基因 3.构建过程 ①用一定的_______切割质粒，使其出现一个 切口，露出_________。 限制酶 黏性末端 ②用____________切断目的基因，使其产生 _________________。 同一种限制酶 相同的黏性末端 ③将切下的目的基因片段插入质粒的_____处， 再加入适量____________，形成了一个重组 DNA分子（重组质粒） 切口 DNA连接酶 ㈡基因表达载体的构建——核心 方法 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入动物细胞 将目的基因导入微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——感受态细胞 （三）将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法 农杆菌的特点: a.易感染双子叶植物和祼子植物 b.具有趋化性 c.Ti质粒上的T-DNA可转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上 （三）将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法 （三）将目的基因导入受体细胞 显微注射技术 a.先提纯含目的基因的表达载体 b.从动物体内取卵 c.显微注射仪进行显微注射 d.将含目的基因的受精卵移植到输卵管或子宫中发育成新个体 操作程序 （三）将目的基因导入受体细胞 大肠杆菌感受态转化法 用Ca2+处理细胞→ 感受态细胞→重组表达载体DNA分子与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 （三）将目的基因导入受体细胞 （四）目的基因的检测与鉴定 检测— ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 方法—— 方法—— 方法—— DNA分子杂交 分子杂交 抗原抗体杂交 鉴定—— 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 15N 15N 14N 14N 变性 变性 探针 转基因生 物的DNA 方法：DNA分子杂交技术 基因探针：放射性同位素等标记的DNA分子 （四）目的基因的检测与鉴定 五 基因工程的应用 ㈠植物基因工程的应用 主要应用： 提高农作物抗逆能力、改良农作物 品质、利用植物生产药物 1.抗虫转基因植物 使用化学农药的弊端： 2.抗病转基因植物 使用最多的目的基因： 病毒外壳蛋白基因和病毒的复制酶基因 抗真菌转基因植物： 几丁质酶基因和抗毒素合成基因 ㈠植物基因工程的应用 3.其它抗逆转基因植物 盐碱和干旱对农作物的危害与什么有关： 与细胞内渗透压调节有关 实例 抗盐碱和干旱作物：调节细胞渗透压的基因 耐寒的番茄：鱼的抗冻蛋白基因 抗除草剂的大豆：抗除草剂基因 五 基因工程的应用 4.利用转基因改良植物的品质 ㈠植物基因工程的应用 五 基因工程的应用 实例 玉米、番茄、矮牵牛花 ㈡动物基因工程的应用 1.动物基因工程的应用体现在那些方面？ 用于提高动物生长速度 用于改善畜产品的品质 用转基因动物生产药物 用于转基因动物作器官移植的供体 五 基因工程的应用 利用转基因动物生产药物 通过分泌的乳汁来 生产所需要的药物 因为产品在奶中形成，需要乳腺组织中特异 表达的启动子（基因的选择性表达）。 获取目的基因 （如药用蛋白基因） 构建基因表达载体 （在药用蛋白基因前 加特异表达的启动子） 显微注射导入哺 乳动物受精卵中 形成胚胎 将胚胎送入 母体动物 发育成转基因动物 （只有在雌性动物中， 转入的基因才能表达） ㈡动物基因工程的应用 五 基因工程的应用 乳房生物反应器: 指可通过分泌的乳汁来生产所需要药物的转基因雌性动物个体。 ㈡动物基因工程的应用 五 基因工程的应用 * 高三生物第一轮复习 专题1基因工程 第一讲DNA重组技术的基本工具 体验高考 1. （09浙江卷）下列关于基因工程的叙述，错误的是 A．目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物 B．限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶 C．人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性 D．载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达 D 体验高考 2. （09安徽卷）将绿色荧光蛋白基因的片段与目的基因连接起来组成一个融合基因，再将该融合基因转入真核生物细胞内，表达出的蛋白质就会带有绿色荧光。绿色荧光蛋白在该研究中的主要作用