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发热伴血小板减少综合征病毒中和抗体酶联免疫吸附试验方法的建立及应用.pdf
微牛物与感染 Journal ofMicrobes and l_rlkctjgns. June 25. 2016. 11(3): 171-175 httD: 万imi. fudan. edu. cD • 171 •
·论著·
发热伴血小板减少综合征病毒中和抗体酶联免疫吸附
试验方法的建立及应用
刘丹丹1 ，焦永军2 ，幸倩云1 ，李志锋2 ，祁贤2 ，宋勇春l
l.南京大学生命科学学院，南京 210093; 2. 江苏省疾病预防控制中心，南京 210009
摘 要:本文旨在对发热伴血小板减少综合征(severe fever with thrombocytopenia syndrome. SFfS) 患者中
和抗体进行定性和效价评估，建立中和抗体酶联免疫吸附试验(enzyme-Ii nked immunosorbent assay.
ELISA) 。用 96 孔微量培养板培养非洲绿猴肾细胞(Vero-E6) 并接种发热伴血小板减少综合征病毒(severe
fever with thrombocytopenia syndrome virus. SFfSV) .以抗核衣壳蛋白(nucleocapsid protein. NP)单克隆抗
体为一抗，使用间接 ELISA 检测 SFfSV NP. 根据光密度(optical density. OD) 判断阳性孔数，采用 Reed
Muench 方法计算病毒半数组织培养感染剂量(50% tissue culture infective dose. TCIDso ) .以反映 SFfSV 在
Vero-E6 细胞中的复制水平。 ELISA 检测中和抗体作用后的病毒残余量，可间接反映中和抗体的作用效果
并进行定量。应用以上建立的微量中和-ELISA 对 10 例 SFfS 患者的双份血清进行中和抗体效价测定.8 例
患者恢复期血清效价较急性期增高 4 倍以上.7 份患者恢复期血清效价达 1 : 1 280. 急性期血清效价最高为
1 : 640 。结果提示，本研究建立的 ELISA 操作简便，结果判定客观，所需时间短，可用于临床血清抗体诊断，
也可用于血清流行病学调查和疫苗效果临床评价等。
关键词:发热伴血小板减少综合征病毒;酶联免疫吸附试验;中和抗体
Detection of neutralizing antibodies against severe fever with
tln咽，mbocytopenia syndrome virus with enzyme-Iinked immunωorbent
assay-based endpoint assessment
1 1 2 2
LIU Dandan • JIAO Yongju时. ZHANG Qianyun • LI Zhifeng , QI Xian ,
1
SONG Yongchun
1. School of Life Science. Nanji咆 University. Nanji咆 21ω98. China; 2. Jiangsu Provincial Center for
Disease Prevention atu1 Control. Nanjing 21ω09. China
Abstract: An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) method was developed for the detection of
n巳utralizing antibodi巳:s against sever巳 fever with thrombocytopenia syndrome virus (S FfSV). Vero- E6 cells
in a 96-well micro-plates were challenged with SFfSV first. and then subjected to the treatme
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