口腔幽门螺杆菌基因定量测定方法的建立及其应用评价.pdfVIP

西部医学 2017 年 1 月第 29 卷第 1 期 Med J West China ,January 2017 , Vo l. 29 , No. 1 • 17 • ·论著· 口腔幽门螺杆菌基因定量测定方法的建立 及其应用评价捋 别明江l 严谨2 王保宁l 谢艳2 祝捷3 王馨田4 王红仁1 李明远l 杨靖5 李尤玲6 (1.四川大学华西基础医学与法医学院，四川成都 610041 ;2. 四川大学华西医院消化内科，囚川成都 610041; 3. 四川万可泰生物技术有限责任公司，四川成都 610041 ;4. 成都树德中学，四川成都 610031; 5. 湖北医药学院附属人民医院感染性疾病科，湖北十堪 442000;6. 十堪市人民医院中西结合科，湖北十堪 442000) E摘要】 目的 建立一种通过口腔唾液的特异、灵敏测定幽门螺杆菌核酸 DNA 的荧光定量 PCR 方法，并对其进 行临床比对评价，为快速、准确、无创检测幽门螺杆菌感染提供新方法。方法 以高度保守的幽门螺杆菌 16s rRNA 序 列为靶序列设计引物，经 Blast 软件对相似序列比对后，筛选出一对最优并与常见胃肠道细菌元交叉反应的引物F 用荧 光定量 PCR 扩增，对号l 物的退火湿度Æ反应体系进行优化，确立反应条件;用已知菌落数(CFU/ml)的幽门螺杆茵茵悬 液与唾液混合，梯度稀释扩增测试后进行灵敏度分析，建立幽门螺杆茵茵落数(CFU/ml)和荧光定量 PCR 循环数(Ct) 关 系的标准曲线;用乳酸杆菌、金黄色葡萄球菌、奈瑟氏菌、小齿类杆菌和唾液链球菌的基因进行特异性分析:利用此方法 对 150 例来自临床胃镜中心的已完成尿素酶CURT)测定，并自愿参加研究者的口腔唾液标本进行收集检测，结果与同 一病人的lC 呼气实验检测结果进行比对分析，计算阳性率、阴性率和符合率。结果 本检测方法的号|物退火温度是 0 Z 62 C ，反应体系 10μ1;对幽门螺杆菌的检测敏感度为 10 CFU/ml; 本检查与乳酸杆菌、金黄色葡萄球菌、奈瑟氏菌、小齿 类杆菌和唾液链冻菌元交叉反应;本方法与14C 呼气实验检测结果比较灵敏度 74.12% ，特异度 86.15% ，符合率 79.33% ， Kappa 值为 0.59 。结论 建立了口腔唾液击战门螺杆菌基因检测的分子诊断方法p 该方法的特异性好，灵敏度 高，为临床检测口腔幽门螺杆菌提供了一个元创、方便的新方法。 E关键词】 唾液;幽门螺杆菌;基因;定量检测 E中固分类号) R 573. 6 【文献标志码) A doi: 10. 3969/j. issn. 1672-351 1. 2017. 0 1. 004 Establishment and application evaluation of quantitative detection method of Helicobacter pylori in oral cavity 2 1 2 3 4 BIE Mingjiang1, YAN Jin , WANG Bao