口蹄疫O型病毒二温式RT-PCR检测方法的建立及初步应用.pdfVIP

中国畜牧兽医 2017 ,44(2):311-318 Ch ina Animal Husbandry Veterinary Medicine doi: 10. 16431/j. cnki.1671-7236. 2017. 02. 002 口蹄疫 0 型病毒二温式 RT-PCR 检测方法的 建立及初步应用 姚怀兵l ， 2 ，赵毅3 ，刘宏3 ，张毅3 ，任方3 ，黄炯h (1.新疆农业大学动物医学学院，乌鲁木齐 830052; 2. 新疆畜牧科学院兽医研究所，乌鲁木齐 830000; 3. 天康生物股份有限公司，乌鲁木齐 830000) 摘 要:试验通过对口蹄疫病毒核昔酸序列的比对分析，在 0 型口蹄疫病毒的 Pl 基因保守区，设计 1 对特异性引 物，应用均匀设计法优化反应参数，建立口蹄疫 0 型病毒二温式 RT-PCR 检测方法。对该法进行特异性试验、敏感 性试验检测。结果表明，该二温式 RT-PCR 方法只对口蹄疫 0 型病毒敏感，对其他血清型的口蹄疫病毒及常见的 猪病病毒均不敏感F 扩增条带与预期目的片段大小相符，扩增片段经克隆、测序发现与引物所在基因序列的同源性 为 100% ;检测病毒 RNA 的敏感性为1. 665 pg/μL ，其敏感性与三步法 PCR 敏感性检测结果没有差异。运用该法 对 54 头攻毒试验的动物进行检测，阳性鉴定结果与兰步法 PCR 鉴定结果一致，与兰步法 PCR 相比该法节省了 20 min ，表明所建立的口蹄疫 0 型病毒二温式 RT-PCR 方法是一种准确、快速、特异、敏感的检测方法。 关键词:口蹄疫 0 型病毒;二温式 RT-PCR;检测方法 中图分类号:S855.3 文献标识码:A 文章编号: 1671-7236(2017)02-0311-08 Development and Application of Two-temperature RT-PCR for Detectionof Type 0 Foot and Mouth Disease Virus 3 3 3 3 YAO Huai七ing]2 ， ZHAO Yi , LIU Hong , ZHANG Yi , REN Fang , HUANG Jiong2樨 (1. College of Veterinary Medìcine , Xìnjìang Agrìcultural Unìversìty , Urumqì 830052 , Chìna; 2. Instìtute of Veterìnary Medìcine , Xìnjiang Academy of Anìmal Scìences , Urumqi 830000 , China; 3. Tecon Biσtechnology Co. , Urumqi 830000 , Chìna) Abstract: According to the gene sequences analysis of foot and mouth disease virus (FMDV) in GenBank ,a pair of specific primers was designed in the conserved sequence of type 0 FMDV P1 gene. The reaction parameters were optimized using the uniform design method to develop a two- temperature RT-PCR method for d巳tection of type