口蹄疫病毒核酸试纸条检测方法的建立.pdfVIP

中国畜牧兽医 2015 ，但(9) :2292-2297 China Animal Husbandry - Veterinαry Medicme doi: 10.1 自 431/j. cnki. 1671-7236.2015.09.011 口蹄疫病毒核酸试纸条检测方法的建立 龚真莉1 ，蒋韬l\ 祁淑芸1 ，陈国韩、2 ，刘艳红1 ，李 勇 l (1.中国农业科学院兰州兽医研究所，家畜疫病病原生物学国家重点实验室， 农业部畜禽病毒学重点开放实验室，兰州 730046: 2. 中农威特生物科技股份有限公司，兰州 730046) 摘 要:本研究通过核酸探针与免疫层析相结合的方法，建立了一种简单、敏感、特异的检测口蹄疫病毒的方法。 试验利用 RT-PCR 方法获得口蹄疫病毒 3D 核音酸片段，在引物中设计了灵敏度高、特异性好的核酸探针 生物 素和地高辛，使扩增产物结合探针。利用胶体金的放大原理将链霉亲和素与金颗粒形成胶体金混合物，从而与 RT-PCR产物中的生物素探针结合。硝酸纤维素膜上端标记生物素化山羊抗兔 IgG 作为指控条带，下端标记抗地 高辛抗体以捕获 RT-PCR 产物中的地离辛探针。组装金标试纸条，检测 RT-PCR 产物，结果表明该核酸试纸条可 以检测到 0.3XIO-3~3XIO-3 I- g/μL ，敏感性高于琼脂糖凝胶电泳，两种方法的符合率高，核酸试纸条检测方法是 一种敏感性高、成本低且费时短的新型检测方法。该方法为口蹄疫病毒检测提供了→种新的思路。 关键词:口蹄疫病毒:3D 基因;核酸试纸条;生物素探针;地高辛探针 中图分类号:Q78 文献标志码:A 文章编号: 1671-7236(2015)09-2292-06 Development of Nucleic Acid Lateral Flow Immunoassay Detection Method for Foot-and-mouth Disease Virus GONG Zhen-lì 1 , JlANGτ泣。 l 莓. Q1 Shu-yun1 , CHEN Guo- doni , LIU Yan-hong 1 , LI Yong 1 O. Key Laboratory 01 Animal Virology 01 Ministry 01 Agriculture , State Key Laboratory 01 Veterinary Etiological Biology , Lanzhou Veterinary Research Institute , Chinese Academy 01 Agricl山ural Sciences , Lanzhou 730046 , China; 2. China Agricultural Vet Biological Scienιe and Technlolgy Co. , Ltd. , Lanzhou 730046 , China) Abstract: ln thìs article. through the combination of nucleic acid probes and immune chromatogra- phy ,a simple , sensitive and specifìc detection system-•• nucleic acid lateral flow immunoassay (NALFIA) for amplifing foot-and-mouth disease virus CFMDV) 3D RT-PCR products was estab lished. An ultra