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福建农林大学大学生创新性实验项目 申 请 书 项目名称：农杆菌介导的开放式甘蔗转基因技术 申 请 人：　　 郑蕊 　　 　　 指导教师： 　　 林庆良　 许莉萍 　　 学 院： 作物科学学院　　 　　 申请金额： 　　 　 3000 　 　 　 联系电话： 　　 　 　　 电子信箱： 　 zhengrui006@126.com　　 福建农林大学教务处 2011年 11月 16日 项目名称 农杆菌介导的开放式甘蔗转基因技术 项目来源 □自主立题 √□教师指导选题 起止时间 自2011年11月至2012年10月 申请金额 3000元 申请人情况 姓名 郑蕊 性别 女 出生年月 1991.06 民族 汉 学院 作物科学学院 专业 农学 年级 2009级 项目组成员情况 姓名 性别 出生年月 学院 专业年级 签字 卢幼梅 女 1990.11 作物科学学院 2009级农学 谢长荣　 男 1990.09 作物科学学院 2009级农学 郑贵彬 男 1989.11 作物科学学院 2009级农学 指导教师情况 姓名 林庆良 职称 高级实验师 所在学科 作物学 学院 作物科学学院 E-mail linqingliang16@ 电话签字 目的和意义：（限500字以内） 甘蔗是最重要的糖料作物和重要的高生物量绿色能源作物。由于甘蔗为工业原料作物和无性繁殖作物，栽培品种一般不开花，所以，甘蔗属于转基因安全风险等级最低（I级）的植物。因此，利用转基因技术改良甘蔗品种就具有独特的优势。 甘蔗农杆菌遗传转化生产过程中由于一些抗菌素经不起高温高压，通常都是在培养基配制后，经过高压灭菌，再在超净工作台上加上经过过滤灭菌过的各种抗菌素、分装到培养瓶或培养皿中。工作程序繁琐，工作量大，人工操作成本高。如果能通过培养基改造，达到即保证植物组织正常生长，又具有杀菌、抗菌或抑制农杆菌功能的培养基，菌类也就不能在培养基中滋生。这种培养基既不需要进行高温高压灭菌，也不需要无菌操作要求，从而可降低组织培养对设施设备的要求，投资成本可相应大幅度降低。由于无需无菌操作，简化了农杆菌遗传转化的组培环节，人工操作的速度将大幅度提高，从而大幅度降低人工成本。不仅如此，由于培养基自身具有杀菌、抗菌或抑菌作用，组织培养过程的污染问题还能得到有效控制，使组培过程脱离严格的无菌环境，从根本上简化组培环节，实现甘蔗开放式农杆菌遗传转化。 已具备的条件及研究工作基础：(限300字以内) 国家甘蔗产业技术研发中心在甘蔗农杆菌遗传转化方面有一定的研究工作基础，并在甘蔗开放式组织培养方面获得了成功，建立了一套有效的技术体系。同时，依托单位还建有农业部福建甘蔗生物学与遗传育种重点实验室等平台，拥有实验所需的仪器设备和设施，项目研究内容是国家已立项项目的部分内容，研究经费来源有保证。上述为开展本项研究提供了良好的技术、平台和经费支撑。 实验内容与方法：（限800字以内，含技术路线） 　1、实验内容 （1）抑菌剂种类和培养基配方筛选。利用研究所在开放式组培成功的基础上，对抑菌剂种类和配方进行筛选，筛选适合于甘蔗农杆菌侵染后离体培养的培养基配方。 （2）抑菌剂浓度筛选。设计各种浓度进行对比试验，根据培养基的污染率，找出合适的浓度范围。 （3）寻找合适的操作环境。在不同环境条件下进行接种操作，寻找在非无菌条件下的合适的操作环境。 （4）开放式离体培养技术的应用。找到适合农杆菌介导的开放式甘蔗遗传转化的培养技术体系后，直接应用于农杆菌介导的外源基因导入甘蔗研究，并进行转化子的筛选与鉴定。 2、技术路线 （1）开放培养技术体系的建立： 抑菌剂种类筛选 e 筛选合适的抑菌剂浓度e操作环境筛选e形成完整的开放培养技术体系　 （2）技术体系的应用： 甘蔗心叶诱导培养14d e 农杆菌侵染 e 共培养　　选择性培养 e 转化子筛选培养 e 抗性苗生根培养 e 抗性苗瓶苗移栽 e 转化子鉴定 预期效果和成果形式：（项目结题时按《大学生创新性实验计划项目学术论文排版要求》完成一篇结题论文） 1、项目结题时按《大学生创新性实验计划项目学术论文排版要求》完成结题总结； 2、形成一篇投稿学报级的论文。 人员分工及进度安排： 1、郑 蕊　　负责筛选合适的抑菌剂浓度和转化子鉴定。 2、卢幼梅　　负责筛选合适操作环境，参加抑菌剂浓度筛选。 3、谢长荣　　负责开放式甘蔗农杆菌转化与转化子筛选，参加转化子鉴定。 4、郑贵彬　　参加开放式甘蔗农杆菌转化与转化子筛选。 经费使用计划： 申请补助经费3000元。主要用于