MCP-1PI3KAkt信号通路参与骨癌痛调控和机制.pdf

MCP-1/PI3K/Akt 信号通路参与骨癌痛调控及机制 中文摘要 MCP-1/PI3K/Akt 信号通路参与骨癌痛调控及机制 中文摘要 第一部分：MCP-1 通过 PI3K/Akt 信号通路活化体外大鼠小胶质细胞 目的 观察 MCP-1 在体外通过细胞内 PI3K/Akt 信号通路对大鼠小胶质细胞的激 活作用。 方法 将体外培养的大鼠小胶质细胞分为六组：空白对照组（I 组）、MCP-1 1min 组（II 组）、MCP-1 10min 组（III 组）、MCP-1 20min 组（IV 组）、MCP-1 30min 组（V 组）、MCP-1+LY294002 组 （VI 组）。收集细胞，通过免疫组化 （n=4 ）、免疫荧光 （n=4 ）、 Western blots （n=4 ）的方法检测每组细胞p-Akt 和 OX-42 的表达变化。 结果 免疫组化结果显示：与其他组比较，II、III 组小胶质细胞 p-Akt 的MOD 值 显著增加(P0.01) ；II 组 p-Akt 的MOD 值与 III 组差异无统计学意义(P0.05)；I 、IV、 V 、VI 各组之间 p-Akt 表达无统计学差异(P0.05) 。免疫荧光和Western Blots 结果显 示：与 I 组相比，III 组小胶质细胞 p-Akt 和 OX-42 表达显著增加(P0.05)；VI 组与 III 组相比 p-Akt 和 OX-42 表达显著降低(P0.05) 。 结论 MCP-1 可能通过激活 PI3K/Akt 信号通路活化体外大鼠小胶质细胞。 第二部分：MCP-1 激活骨癌痛大鼠脊髓背角 PI3K/Akt 信号通路 目的 观测在骨癌痛大鼠模型鞘内注射 MCP-1 中和抗体后，其痛阈的改变以及 脊髓背角 p-Akt 表达的变化。 方法 SPF 级雌性 Sprague-Dawley(SD)大鼠 40 只，体重 190~210g，随机分为 5 组（n=8 ）：假手术组（I 组），于大鼠左侧骨干骺端骨髓腔内注射 10μl PBS 液；假手 术+MCP-1 中和抗体组（II 组），在注射 PBS 液后 7~9d 鞘内注射 MCP-1 中和抗体 (1μg/μl)10μl，每天 1 次；骨癌痛组（III 组），于大鼠左后肢胫骨干骺端骨髓腔内注 射乳腺癌细胞 Walker256 10μl(2×107/ml)构建胫骨癌痛模型；骨癌痛+对照 IgG 组(IV I 中文摘要 MCP-1/PI3K/Akt 信号通路参与骨癌痛调控及机制 组) ，在注射肿瘤细胞后 7~9d 鞘内注射对照 IgG(1g/L)10μl，每天 1 次；骨癌痛+MCP-1 中和抗体组（V 组），在注射 Walker256 细胞后 7~9d 鞘内注射 MCP-1 中和抗体 (1g/L)10μl，每天 1 次。观测术前 1d，术后 1、3、5、7、8、9d 各组大鼠机械痛阈。 术后 9d 给药测痛后处死大鼠，取各组大鼠的 L4-6 脊髓组织进行免疫荧光染色和 Western Blots ，检测脊髓背角p-Akt 的表达。 结果 与 I 组相比，骨癌痛（III 、IV 组）大鼠机械痛阈明显下降(P0.01)，脊髓 背角 p-Akt 阳性细胞数显著增加，蛋白表达上调(P0.01)，而 II 组上述指标无明显差 别(P0.05) 。与III 组或 IV 组比较，V 组鞘内注射 MCP-1 中和抗体后能明显提高骨癌 痛大鼠的机械痛觉阈值(P0.01)，降低脊髓背角p-Akt 的表达(P0.01) 。 结论 MCP-1 可能通过激活脊髓背角 PI3K/Akt 信号通路参与大鼠骨癌痛的发生。 第三部分：鞘内注射 LY294002 缓解大鼠骨癌痛 目的 观察鞘内注射 PI3K 抑制剂 LY294002 后，骨癌痛大鼠在疼痛行为学和脊髓 背角小胶质细胞的表达及活化方面的改变。