MPP+通过TOR信号通路下调PC12细胞的自噬活性.pdfVIP

MPP+通过mTOR 信号通路下调PC12 细胞的自噬活性 中文摘要 + MPP 通过mTOR 信号通路下调PC12 细胞的自噬活性 中文摘要 目的： + 1. 观察不同浓度及不同时间点的 MPP 对 PC12 细胞的存活率的影响，确定 PD （Parkinson’s disease ）细胞模型的合适浓度及时间范围； + 2. 观察 MPP 对 PC12 细胞的存活率、LDH 漏出率及自噬-溶酶体途径相关蛋白 LC3-II 、Beclin1 的表达水平的影响，并观察雷帕霉素(Rapamycin，RAPA) 的拮抗作用； + 3. 观察MPP 对自噬上游调控蛋白mTOR （哺乳动物雷帕霉素靶蛋白）及其信号 通路相关蛋白的表达水平影响，并观察RAPA 的作用。 方法： + + 根据不同浓度及作用不同时间MPP 对PC12 细胞活性的影响，选择合适的MPP + 处理浓度及时间，利用PC12 细胞经过MPP 处理制作帕金森模型，再给予RAPA 进 行干预：MTT 法检测细胞存活率，LDH 试剂盒检测上清液中的LDH 活性，Western blot 技术分析LC3-II 、Beclin1 、mTOR 、Raptor 、Rictor 、p-p70s6k 、p-4E-BP1 蛋白表达水 + 平的变化，探讨MPP 调节PC12 细胞自噬活性的机制。 结果： + + 1. PC12 细胞相对存活率随MPP 浓度梯度呈降低趋势，MPP 浓度在0.25～3.0mM + 范围内细胞相对存活率显著下降（P0.05～0.001 ）；PC12 细胞相对存活率随MPP 时 间梯度呈降低趋势，在8～48h 范围内细胞相对存活率显著下降（P0.05～0.001 ）； + 2. MPP 处理 PC12 细胞 24h，细胞相对存活率显著降低（P0.001 ），上清液中 LDH 漏出率显著升高（P0.001 ），LC3-II 的表达显著受抑（P0.01 ），Beclin 1 的表达 显著受抑（P0.01 ），RAPA 干预后有效提高了细胞相对存活率（P0.001 ），降低上 清液中LDH 活力（P0.001 ），显著上调了LC3-II 的表达（P0.01 ）和Beclin 1 的表 达（P0.01 ）； + 3. MPP 处理PC12 细胞24h，显著上调了mTOR 信号通路相关蛋白的表达，RAPA 干预后下调mTOR 信号通路。 I 中文摘要 MPP+通过mTOR 信号通路下调PC12 细胞的自噬活性 结论： + 1. MPP 可以通过下调PC12 细胞的自噬活性导致细胞损伤，RAPA 表现出拮 抗作用。 + 2. MPP 可能是通过激活mTOR 信号通路下调PC12 细胞的自噬活性，RAPA 能 抑制mTOR 信号通路促进自噬，从而对PC12 细胞起到保护作用。 关键词：mTOR ；自噬；PC12 细胞；雷帕霉素；帕金森病 作 者：杜建红