- 1、本文档共61页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
iga天疱疮dif
免疫荧光技术在某些皮肤病中 的 应 用 主讲人:周桂芝 概 述 抗原与相应的抗体接触后,立即结合而形成不易分离的抗原抗体复合物。在结合之前,先使抗体(或抗原)与某些显色剂偶联,则形成的抗原抗体复合物由不可见成为可见,从而可以确定组织中是否存在某种抗原(或抗体),这就是免疫病理技术的基本原理。根据抗体(或抗原)标记物的不同分为免疫荧光技术和免疫酶标技术。 免疫荧光技术的发展 · 1941年 由Coons首先建立了免疫荧光技术 · 1961年 由Kaskin首先将该技术应用到皮肤科 · 1963年 Burnham等报告了红斑狼疮病人表皮、 真皮间基底膜IgG、C3沉积 · 1964年 Beutner和Jordon利用免疫荧光技术研究天疱疮 · 1967年 区分出大疱性类天疱疮 · 70年代开始应用免疫电镜去认识大疱性皮肤病 近来,皮肤病理工作者应用免疫荧光技术对大疱性皮肤病、红斑狼疮、扁平苔癣、银屑病、皮肤血管炎等免疫病理特征进行了研究,并已广泛应用于常规病理诊断、鉴别诊断及指导治疗。 缺点: (1)标记的荧光极易褪色,不能长久保存。 (2)影响荧光强度的因素很多,而且判断阳性荧光与非特异性荧光有一定的主观性。 (3)阳性荧光细胞无法与常规石腊切片对照观察,组织学定位困难。 (4)需要较好的冰冻切片机和荧光显微镜等,因此它的应用受到一定的限制。 免疫荧光技术 (一)原理: 将荧光色素(异硫氰酸荧光素)与特异性抗体以化学的方法结合起来,即为荧光抗体,再用这种荧光抗体作为一种试剂,在特定的条件下浸染标本,与标本中相应的抗原结合。在组织中形成含有荧光标记的抗体—抗原复合物,再用荧光显微镜观察标本。 (二)方法: 1、直接法(DIF):用荧光素标记的特 异性抗体来检查未知抗原。如组织中存有相 应的抗原,便结合,形成复合物。 抗原 标记抗体 玻片 标记抗原抗体复合物 优点: (1)方法简单,需时短。 (2)特异性强。 缺点: (1)不能用已知抗原检查未知抗体。 (2)为了检查各种抗原,需要准备多种特异性荧光抗体。 (3)敏感性较差。 2、间接法(IIF):用荧光标记的抗体来检查未知抗原或未知抗体。 抗原 抗原抗体 复合物 未标记抗体 玻片 抗原抗体复合物 标记抗体 双抗体复合物 优点: (1)既能检查未知抗原,也能检查未知抗体。 (2)用一种标记抗体,能检查多种抗体复合物。 (3)敏感性高。 缺点: (1)由于参加的因素多,受干扰的机会也多,故结果有时判断困难。 (2)方法较麻烦,时间较长。 3、补体荧光抗体法:用荧光素标记的抗补体抗体检测未知抗原或未知抗体。 抗原+抗体 +补体 复合物 抗原 抗体 补体 抗原+抗体+补体复合物 抗补体标记抗体 荧光标记补体复合物 优点:
文档评论(0)