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免疫荧光技术在某些皮肤病中 的 应 用 主讲人：周桂芝 概 述 抗原与相应的抗体接触后，立即结合而形成不易分离的抗原抗体复合物。在结合之前，先使抗体（或抗原）与某些显色剂偶联，则形成的抗原抗体复合物由不可见成为可见，从而可以确定组织中是否存在某种抗原（或抗体），这就是免疫病理技术的基本原理。根据抗体（或抗原）标记物的不同分为免疫荧光技术和免疫酶标技术。 免疫荧光技术的发展 · 1941年 由Coons首先建立了免疫荧光技术 · 1961年 由Kaskin首先将该技术应用到皮肤科 · 1963年 Burnham等报告了红斑狼疮病人表皮、 真皮间基底膜IgG、C3沉积 · 1964年 Beutner和Jordon利用免疫荧光技术研究天疱疮 · 1967年 区分出大疱性类天疱疮 · 70年代开始应用免疫电镜去认识大疱性皮肤病 近来，皮肤病理工作者应用免疫荧光技术对大疱性皮肤病、红斑狼疮、扁平苔癣、银屑病、皮肤血管炎等免疫病理特征进行了研究，并已广泛应用于常规病理诊断、鉴别诊断及指导治疗。 缺点： （1）标记的荧光极易褪色，不能长久保存。 （2）影响荧光强度的因素很多，而且判断阳性荧光与非特异性荧光有一定的主观性。 （3）阳性荧光细胞无法与常规石腊切片对照观察，组织学定位困难。 （4）需要较好的冰冻切片机和荧光显微镜等，因此它的应用受到一定的限制。 免疫荧光技术 （一）原理： 将荧光色素（异硫氰酸荧光素）与特异性抗体以化学的方法结合起来，即为荧光抗体，再用这种荧光抗体作为一种试剂，在特定的条件下浸染标本，与标本中相应的抗原结合。在组织中形成含有荧光标记的抗体—抗原复合物，再用荧光显微镜观察标本。 （二）方法： 1、直接法（DIF）：用荧光素标记的特 异性抗体来检查未知抗原。如组织中存有相 应的抗原，便结合，形成复合物。 抗原 标记抗体 玻片 标记抗原抗体复合物 优点： （1）方法简单，需时短。 （2）特异性强。 缺点： （1）不能用已知抗原检查未知抗体。 （2）为了检查各种抗原，需要准备多种特异性荧光抗体。 （3）敏感性较差。 2、间接法（IIF）：用荧光标记的抗体来检查未知抗原或未知抗体。 抗原 抗原抗体 复合物 未标记抗体 玻片 抗原抗体复合物 标记抗体 双抗体复合物 优点： （1）既能检查未知抗原，也能检查未知抗体。 （2）用一种标记抗体，能检查多种抗体复合物。 （3）敏感性高。 缺点： （1）由于参加的因素多，受干扰的机会也多，故结果有时判断困难。 （2）方法较麻烦，时间较长。 3、补体荧光抗体法：用荧光素标记的抗补体抗体检测未知抗原或未知抗体。 抗原+抗体 +补体 复合物 抗原 抗体 补体 抗原+抗体+补体复合物 抗补体标记抗体 荧光标记补体复合物 优点：