基于核酶技术的人线粒体色氨酸tRNA的高效转录及其活性鉴定.PDF

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2009, November 25; 25(11): 1732-1738 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ © 2009 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 生物技术与方法 tRNA 1 1 2 1 1 3 巩菊芳 , 曹诣斌 , 陈祥龙 , 齐育平 , 杨小强 , 金晓玲 1 , 321004 2 , 200031 3 , 410004 : 利用T7 RNA 聚合酶(T7 RNA polymerase, T7 RNAP)的体外转录方法因其简便、高效而在RNA 制备中得到广 泛应用, 但该法由于T7 RNAP 的启动子跨越转录起始位点而会导致转录产物多出附加序列; 如果去掉T7 启动子的转录 起始位点, 则会严重降低T7 RNAP 的转录活性。本实验很好地消除了以上弊端, 将T7 RNAP 的高效转录系统与核酶高 度专一的自剪切技术相结合, 成功构建了一种不影响转录效率的体外转录方法, 而且转录后核酶能够在设计的特定位 点进行自剪切并释放出目的RNA, 得到了活性达 113.6 pmol/µg 的人线粒体色氨酸tRNA(HmtRNATrp (UCA)) 。该方法转录 效率高、重复性好, 适合RNA 的大量精确制备。 : 体外转录, 核酶, 人线粒体色氨酸 tRNA High-level transcription of human mitochondrial tRNATrp based on ribozyme and characterization on its aminoacylation activity 1 1 2 1 1 3 Jufang Gong , Yibin Cao , Xianglong Chen , Yuping Qi , Xiaoqiang Yang , and Xiaoling Jin 1 College of Chemistry and Biology, Zhejiang Normal University, Jinhua 321004, China 2 State Key Laboratory of Molecular Biology, Institute of Biochemistry and Cell Biology, Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences , Shanghai 200031, China 3 School of Environment and Art Design, Central South University of Forestry and Technology, Changsha 410004, China Abstract: In vitro transcription systems with T7 RNA polymerase