基因编码3鄄氯酪氨酸改造荧光蛋白-生物化学与生物物理进展.PDF

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2012, 39(4): 378~387 因编码 氯酪氨酸改造荧光蛋白* 3 1) 2) 1)** 张维 王 琦 王江云 1) 2) ( 中国科学院生物物理研究所，北京100 101； 北京大学生命科学学院，北京100871) 摘要 蛋白质翻译后修饰产生的3- 氯酪氨酸(3-Cl-Tyr)与多种疾病相关，包括帕金森病、哮喘、动脉粥样硬化等 在动脉粥 样硬化患者 发现AopA 1 192 位酪氨酸有高水平的氯化，显示此种修饰可能会促进病变 为了研究酪氨酸氯代对蛋白质功 能的调控作用，我们发展了将3-Cl-Tyr 定点特异插入到蛋白质中的方法 因为3-Cl-Tyr 酚羟基上的质子比酪氨酸(Tyr)更容 易解离，具有更低的pKa ，在绿色荧光蛋白GFP 及其突变体，以及光转化荧光蛋白mEOS2 荧光活性 心 分别用3-Cl-Tyr 取代Tyr ，使得GFP 发色基团的pK a 降低到4.7，并且具有与EGFP 相似的量子产率，使mEOS2 发色基团的pKa 降低到4.2. 这样使得荧光蛋白的发色基团在酸性条件下仍然能以去质子化形式存在，在500 nm 以上仍然具有较强吸收，避免了用400 nm 左右激光激发及其对细胞及细胞器造成的光损伤 这种新型的荧光蛋白突变体将适用于溶酶体、吞噬酶体等酸性细胞器 关键词 绿色荧光蛋白，非天然氨基酸，密码子扩展 学科分类号 Q6 DOI: 10.3724/SP.J.1206.201 1.00299 生物体产生的活性氧物质一方面可以 到防御 和免疫作用，另一方面会对自身蛋白造成氧化损 O 伤，其 酪氨酸氯代是一种常见的氧化修饰，目前 已知这种氧化修饰与帕金森氏病、哮喘、动脉粥样 N R N 硬化、急性心肌梗死等疾病密切相关[1-2] HO 载脂蛋白ApoA1 是高密度脂蛋白主要成分， R 介导胆固醇从血管壁到血液的反向传输 ApoA1 192 位酪氨酸是髓过氧化物酶氯代修饰的主要位 O 点，在动脉粥样硬化患者中发现有高水平的 Cl [3] ApoA1 氯代 目前研究ApoA1 氯代与功能主要 N R 采用位点突变和次氯酸氯化的方法，除了192 位酪 N HO 氨酸可以被氯化，其他氨基酸和位点也可以被氯化 R 或氧化，从而使目前ApoA1 氯化氧化与功能损伤 的关系仍然存在争议[4-5]