博莱霉素致肺纤维化小鼠肺组织中磷酸化AKT、N-kBp65的表达和意义.pdfVIP

·中文论著摘要· 博莱霉素致肺纤维化小鼠肺组织中磷酸化AKT, NF．kBp65的表达及意义 目 的 肺纤维化(PF)是最常见的肺间质疾病也是呼吸系统最严重疾病之一，因肺纤 维化具有原因不明，致病机制不清，是多因素的结果，近年来信号传导通路在肺 间质纤维化发生过程中的异常改变及其导致细胞生长失控的机制成为研究的热 点。 近年来有研究发现，磷酸化蛋白激酶B(AKT／PKB)信号传导通路在肺纤维化 中细胞增殖、分化、新陈代谢及凋亡过程中有着重要作用。在～些病理因素的刺 激下，AKT蛋白转录增加或调节异常导致其过度表达或异常活化，通过作用于下 游分子影响细胞周期进程，促进细胞增殖，抑制细胞凋亡，促进肺问质纤维化生 物学行为。可被AKT／PKB通路直接或间接影响下游分子主要包括细胞增殖和蛋 白合成相关因子和一些凋亡相关因子。核转录因子kB(NF-kB)，作为信号传导通 of 路的中枢，是AKT下游重要因子之一，通常与其抑制蛋I兰t(inhibitorKB，ma) 结合，以无活性形式存在于细胞质中。它的主要形式为p50和p65组成的二聚体， p50是DNA结合部位，p65参与基因转录起始调节。在一些病理因素的刺激下， NF-kB的异常活化可调节与细胞增殖和凋亡有关的基因转录，促进细胞增殖，抑 制细胞凋亡。 AKT及其下游信号分子在肺纤维化中的表达及意义，目前国内外研究尚少。 的表达情况，探讨磷酸化AKT、NF-kBp65在肺纤维化发生发展中的作用，为肺 纤维化的发病机理及治疗提供新的理论依据及新的治疗靶点。 材料与方法 一、实验材料 (一)实验对象 华实验动物技术公司)，寄养于中国医科大学附属盛京医院动物中心。‘ (二)主要试剂 5毫克／支(日本化药株式会社，批号： l、博莱霉素A2(BLM-一A2)1 TaKaRa南京凯基公司) 3、即用型SP免疫组化试剂盒及DAB显色剂(北京中杉金桥生物技术有限公 司) 二、实验动物模型的建立、分组与标本处理 (一)实验动物模型建立、分组 将60只C57BL／6雌性小鼠随机分为实验组与对照组。所有实验小鼠均用10％ 水合氯醛(3ml／kg)腹腔注射麻醉后，无菌手术暴露气管进行模型制作。实验组(BLM ul。 理盐水。对照组：10只，第0天气管内注入生理盐水20 (二)标本的采集与处理 在实验的第l、3、7、14、28天对实验组取材，每次随机选取10只。第7、 14天对对照组取材，每次随机选取5只。以腹腔主动脉放血法处死实验小鼠，将 左肺完整取出，放入4％多聚甲醛中固定3h，常规石蜡包埋，制成4um厚的组织 切片，行苏木素．伊红染色及免疫组化 三、肺组织常规病理分析 (一)常规病理 肺组织经不同浓度酒精常规脱蜡至水，行HE染色。 (二)肺泡炎症及纤维化程度的组织病理学评分方法 2 依照Szapiel法确定肺泡炎症及纤维化程度，两者均分4级，分别记为1、2、 3、4分。 四、实验方法及检测指标 五、统计学分析 应用SPSSl7．0统计软件进行分析，所有数据均以均数4-标准差表示，计量资 料组间比较采用独立样本t检验，组内不同时间点比较采用单因素方差分析，单 因素相关分析采用spearson相关分析法，P0．05为差异有统计学意义。 实验结果 一、肺组织的病理变化 4(一)大体观察 对照组各时间段双肺表面光滑有光泽质地软色粉红，实验组第7，14天双 肺无光泽可见散在灶性出血点(尤以第7天最为明显)，第28天可见双肺苍白、 色灰暗无光泽，质地硬。 ， (二)肺组织病理HE染色显示 对照组未见明显的炎症细胞及大片实变改变。实验组第1天仅见少量炎性细 胞，肺泡壁无明显变化，小鼠经气管