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葡萄籽中原花青素提取方法分析 　　基金项目：吉林省教育厅“十一五”科学技术研究项目（项目编号：吉教科合字[2010]第517号）葡萄是日常生活中非常常见的水果，可以直接使用，但绝大部分作为酿酒原料，而酿酒后的葡萄籽多被作为工业废渣弃去，这不仅浪费资源而且污染环境。研究发现，葡萄籽中富含原花青素。花青素具有抗氧化、抗突变、抗癌细胞等多种生物活性。原花青素是一种可供选择的、极好的保健品原料，此外还具有抗辐射、抗疲劳，改善记忆力等作用。本文初步探索有关葡萄籽中原花青素的溶剂提取方法，研究了最佳溶剂提取条件，为下步分离提纯提供理论依据。 　1材料与方法 　11材料 　巨丰葡萄籽；原花青素，无水乙醇、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、三氯甲烷、水均为分析纯。 　12设备 　食品粉碎机，北京环亚天元机械技术有限公司；722紫外可见分光光度计，上海悦丰仪器仪表有限公司；电子天平，上海卓精BSM”2100；恒温水浴锅，广州威德玛环境仪器有限公司；85-2数显恒温磁力搅拌器；紫花牌循环水真空泵；飞鸽牌系列离心机。 　13试验方法 　131标准曲线的绘制 　分别取原花青素标准液100、200、300、400、500mL于10mL刻度试管中，加入无水乙醇定容至10mL，塞紧后充分摇匀，制得浓度分别为104、208、312、416、520ug/mL的标准系列溶液。在500nm处以无水乙醇作空白调零扣除背景值，测定标准系列溶液吸光值A，并绘制原花青素浓度-吸光值标准曲线。溶液中原花青素浓度在104～520ug/mL范围内，与吸光值A呈线性关系，其回归方程式为A=3612C-0032，相关系数r=09991。 　图1原花青素浓度-吸光值标准曲线 　提取率=ncv/mtimes;100% 　n 提取剂稀释倍数 　c 稀释后提取液中花青素浓度 mg/mL 　v 提取剂体积mL 　m 葡萄籽质量mg 　132提取时间的确定 　准确称取200g葡萄籽粉5份（经过石油醚脱脂处理），分别取乙醇溶液（浓度为70%）14mL与之混合，分别于50℃水浴中加热提取30min、40min、50min、60min、70min，自来水冷却至室温，并经离心机离心20min（4 000r/min），最后取上清液测原花青素含量。 　133提取温度的确定 　准确称取200g葡萄籽粉5份（经过石油醚脱脂处理），分别取乙醇溶液（浓度为70%）14mL与之混合，于30℃、40℃、50℃、60℃、70℃水浴中加热提取30 min，自来水冷却至室温，并经离心机离心20min（4000r/min），最后取上清液测原花青素含量。 　134料液比的确定 　分别称取200 g石油醚脱脂后的葡萄籽5份，按1：6、1：7、1：8、1：9、1：10的比例与70%的乙醇溶液混合，于50℃水浴中提取30min，自来水冷却至室温，4000r/min离心20min，取上清液测原花青素含量。 　2结果与分析 　正交试验结果分析，通过单因素试验确定了以浓度为60%的乙醇为提取溶剂，分别选取提取温度、提取时间、料液比为3个因素，每个因素采取3个水平，并以原花青素提取率为参考指标进行L933进行正交试验，正交试验因素水平表及正交试验结果分别见表1。 　表1原花青素提取工艺因素水平表 　水平因素提取温度（A）℃提取时间（B）min料液比（C）g/mL140401：6250501：7360601：8 　三个因素对原花青素提取率影响的主要顺序为：Bgt;Agt;C，即提取时间gt;提取温度gt;料液比，且最佳组合为A3B2C1。即最佳组合为提取温度为60℃，提取时间为50min，料液比为1：6 。 　3结论 　通过单因素试验和正交试验得到最佳提取条件，即溶剂为乙醇（乙醇浓度为60%）、提取时间为50min、提取温度为60℃、料液比为1：6，此时，原花青素的提取率为324。 　参考文献 　[1]奚洪民，邹宪芝，刘进邦等.葡萄耔中低聚原花青素研究进展[J].化学世界，2004（12）：759-762. 　[2]范明远，叶音.体内自由基清除剂及抗氧化剂-原花青素的研究进展[J].中国预防医学杂志.2001，2（04）：303-305. 　[3]孙志广，赵万洲，陆茵.葡萄籽原花青素对鼠伤寒沙门氏菌的抗诱变作用[J].癌变畸变突变，2002，14（03）：191-194. 　作者简介：马井喜（1981-），男，汉族，硕士，吉林农业大学发展学院讲师，研究方向：功能性食品。 1