人B7-H4克隆抗体的制备.pdfVIP

人B7一H4单克隆抗体的制备 摘 要 制T细胞增殖、细胞因子的产生和细胞周期的进程来负性调节T细胞的免疫应 答，其在多种肿瘤组织中的高表达，与肿瘤的免疫逃逸关系密切，并已被确认是 某些肿瘤的新型肿瘤标志物。 【目的】 制备鼠抗人B7．H4单克隆抗体，并对其进行初步鉴定，为进一步研制B7．H4 检测试剂盒奠定基础。 【方法】 因工程茵扩大诱导表达，亲和层析法纯化诱导的蛋白。 2．将纯化的蛋白与弗氏佐剂乳化，将其作为抗原免疫BALB／c雌性小鼠。 3．融合骨髓瘤细胞与脾淋巴细胞，采用酶联免疫技术筛选阳性杂交瘤细胞， 有限稀释法对阳性细胞进行克隆化。 4．将杂交瘤接种于BALB／c雌性小鼠腹腔中诱导产生腹水，采用亲和层析 法纯化腹水中单抗。 5．W|esterIl b10t鉴定单克隆抗体。 【结果】 1．蛋白的表达与纯化：制各的融合蛋白经SDS．PAGE鉴定，其纯度达到电泳 纯，可用做单抗制备的靶抗原。 2．单抗的制备与鉴定：用纯化的hB7．H4融合蛋白免疫BAI．B／c小鼠，对小 鼠外周血多抗效价检测，结果其双向琼脂扩散效价为1：16，EUSA效价达 1：12800，提示小鼠免疫成功。经细胞融合、筛选、克隆化后得到了持续、稳定 分泌鼠抗人B7．H4单克隆抗体的杂交瘤细胞株；ELISA效价达到1：16000； W．cSt锄b10t分析结果显示，抗hB7．H4单抗与免疫原及天然抗原均能特异性结 厶 口o 【结论】 成功制备了鼠抗人B7．H4单克隆抗体，通过对免疫原及天然抗原进行检测， 提示该抗体可用于B7．H4检测，为进一步研制B7．H4检测试剂盒奠定了基础。 【关键词】B7．H4；单克隆抗体；肿瘤 2 MonoclonaI B7一H4 Antibody ofMouseAn小human Pr印aration Abstl‘act B7 to and iIIlmun0910t，uliIl吼lp*family B7．H4(B7S1、B7x)whichbelongs Tcells Tceus byi1111ibitingpr01i断ati0Il， reguhtesiIIlⅡ删1itynegatiVely 触ily．n is proteiIl cyCleprogression·B7-H4 iIlllibit吨c吵。妣pf0拟ioll，瓶d舭est啦cells could iIl tllmor t胁B7·H4 many cells砒血h叭ggeStcd e砷ressed cO璐酞铋tlyl呻er ne